张春燕，王秀敏

    (1.安阳市人民医院护理部；2.安阳市人民医院消化内科，河南 安阳 455000)

    食管癌是常见的消化道恶性肿瘤，而且中国人群食道癌发病率显著高于世界平均水平。 食管癌具有两种病理分型，其中约80%患者为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)，20%患者为食管腺癌(esophageal adenocarcinoma，EAC)。 尽管手术治疗和放、化疗在一定程度上延长了食管癌患者的生存期，但由于癌症的转移和复发依然影响食管癌预后的重要因素[1,2]。启膈散主治噎膈、吞咽困难，临床研究发现，启膈散在防治食管癌癌前病变、 改善中晚期患者生存质量方面具有一定功效[3-5]，然而其有效成分及作用机制还没有深入的研究。 肿瘤细胞通过上皮-间质转化增强侵袭和转移能力，因此抑制上皮-间质转化的过程对防治肿瘤的转移和复发具有重要意义。本研究通过建立体外培养的食管癌细胞系Eca109上皮-间质转化模型，探究了启膈散对食管癌上皮-间质转化的影响及机制。

    1 材料和方法

    1.1 药物 沙参15g，丹参15g，荷叶蒂15g，茯苓15g，川贝母6g，郁金10g，砂仁壳3g，加入1000ml水加热煮沸煎制。 中药煎出液经离心去除药渣，上清放置于旋转蒸发仪中，40℃蒸发浓缩。 随后将浓缩液转移到-80℃冰箱冷冻过夜，后于冻干机中制备冻干粉，称量后分装保存。 使用前，用DMEM 培养基溶解配置成5mg/ml 的母液，经过0.22μm 滤器过滤除菌，放置于4℃保存。

    1.2 主要试剂和耗材 DMEM 高糖培养基(美国GE 健康公司)、胎牛血清(美国Gibco 公司)、胰蛋白酶-EDTA 消化液(美国Gibco 公司)、CCK-8 细胞活性试剂盒(日本同仁化学研究所)、细胞培养皿和培养板(美国康宁公司)、Transwell 小室(美国BD 公司)、小鼠抗E-钙粘蛋白抗体和小鼠抗N-钙粘蛋白抗体(美国Abcam 公司)、小鼠抗波形蛋白抗体(美国CST 公司)、 兔抗GAPDH 抗体(美国Santa Cruz 公司)、HRP 偶联抗小鼠IgG 抗体和抗兔IgG 抗体(天津三箭生物公司)、TriZOL 总RNA提取试剂(美国ThermoFisher 公司)、qPCR super Mix(美国Roche 公司) ......