李建军 宋曙霞 陈克芳 潘爱珍 黄启辉 梁俊雄 易伟民

    血瘀证是冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的主要证型。证是遗传和环境因素相互作用的病理表现，证与遗传变异间的关系研究甚少，NO与血管紧张素II(AngII)生理作用相反，在血瘀证形成中有重要作用。本文就冠心病血瘀证与血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme，ACE)基因多态性和内皮型一氧化氮合成酶( endothelial nitric oxide synthase，eNOS)基因G894T变异的关系进行探讨。

    1 对象与方法

    1.1 一般资料

    从2010年6月至2011年3月，在广州中山大学附属第二医院共诊治广东籍汉族冠心病患者160例，经中医辨证分为血瘀证和非血瘀证，其中血瘀证组119例，其中男62例，女57例，平均年龄(64.4±10.62)岁。非血瘀证组41例，其中男21例，女20例，平均年龄(59.5±15.52)岁。

    1.2 诊断标准

    冠心病诊断参照1979年WHO制定的缺血性心肌病“心绞痛”、“心肌梗死”的诊断标准[1]，以患者临床症状，体征和病史结合心电图改变进行诊断，全部病例均经冠状动脉造影。血瘀证诊断根据1986年中国中西医结合学会活血化瘀专业委员会制定的血瘀证诊断标准[2]。

    1.3 纳入标准

    (1)经冠状动脉造影诊断，符合冠心病诊断标准；(2)符合中医诊断标准。

    1.4 排除标准

    (1)有严重心、肾、肝、肺功能不全者；(2)半年内有外伤和外科手术史者；(3)合并恶性肿瘤者。

    1.5 DNA提取

    抽取患者2 ml静脉血，乙二胺四乙酸钠(EDTA)抗凝，参照TaKara Company DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。

    1.6 ACE基因型检测

    上游引物序列5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’，下游引物序列5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。引物均由达安基因公司合成。PCR反应条件：94℃预变性5分钟→94℃变性30秒→62℃复性30秒→72℃延伸1分钟，32个循环后72℃延伸10分钟结束。取4 ul PCR产物在2%的琼脂糖凝胶电泳鉴定分型，ACE基因上若存在Alu序列，PCR产物位490 bp，即为插入型(I型)；没有Alu序列，PCR产物为190 bp,为缺失型(D)型 ......