黄伟炜 陈一明 宫晓光 刘宁 伍海鹰 王保春 常顺伍

    咖啡是茜草科多年生常绿小乔木咖啡树种子的加工产品，研究表明，咖啡中的生物活性物质具有明显的肝脏保护作用，咖啡的消耗量与肝纤维化和肝硬化的发病率均呈负相关[1-2]。绿原酸(chlorogenic acid，CGA)和咖啡因是咖啡中的主要活性物质。CGA属于酚类抗氧化剂，有清除超过氧化物阴离子及抑制过氧化物活性的作用，还可以抑制乙肝病毒表面抗原，抑制和杀灭多种致病菌和病毒，并具有抗肿瘤、抑制突变、保肝利胆、降血压以及降血脂等功能[3-4]。

    本实验建立了阻塞性黄疸大鼠模型，应用CGA对模型鼠进行干预，从肝脏超微结构和分子水平上检测和观察CGA对大鼠肝纤维化的影响，旨在研究CGA对大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    清洁级SD大鼠，雄性，体重(260±20)g，购自海南省人民医院实验动物中心。

    1.2 仪器及试剂

    岛津CL-7200全自动生化分析仪，Bio-Rad核酸与蛋白电泳仪，小鼠抗大鼠Bax和bcl-2单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的绵羊抗小鼠单克隆II抗，总RNA提取试剂盒，RT-PCR引物等。

    1.3 动物模型的制作

    雄性SD大鼠72只，随机分成假手术组、模型组和绿原酸治疗组，每组24只。(1)假手术组(胆总管不结扎+生理盐水组，SO组)：术前禁食12小时，禁饮4小时，腹腔内注射氯氨酮(100 mg/kg)麻醉。无菌操作，取上腹部正中切口，长约2 cm，仅分离、显露胆总管，逐层关腹。术后6小时，腹腔内注射生理盐水(2 ml/kg，1次/天)；(2)模型组(胆总管结扎+生理盐水组，BDL+NS组)：分离、显露胆总管后，于十二指肠上缘用2/0丝线双重结扎胆总管，在两结扎线间切断，并剪去少许胆总管，然后逐层关腹。术后6小时，腹腔内注射NS (2 ml/kg，1次/天)；(3)绿原酸治疗组(胆总管结扎+绿原酸组，BDL+CGA组)：胆总管结扎方法与模型组相同。术后6小时，腹腔内注射绿原酸(40 mg/kg, 1次/天)。每组术后再随机分设7天、14 天和21天共3个时相点 ......