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编号:1420389
从全基因表达谱角度探讨理冲汤抑制人子宫肌瘤细胞的作用机制
http://www.100md.com 2015年4月21日 环球中医药 2015年第3期
差异基因,通路,1材料与方法,1组织来源,2主要试剂和仪器设备,3药物血清制备,4细胞培养及给药方法,5实验方法,6统计学处理,2结果,1含药血清干预,2RNA质量检测,3基因表达谱分析,3讨论
     韩虹娟 李冬华 钱睿亚 许昕 黄玉华 倪婧 张武芳 耿建国 赵文景

    子宫肌瘤(uterine leiomyoma)是女性生殖系统最常见的良性肿瘤,育龄期妇女发生较多,发病年龄多为30 ~50 岁,根据部位的不同,其症状以阴道出血、腹部包块、白带增多、疼痛及不孕不育等为主,严重影响妇女的生活质量。迄今为止,子宫肌瘤的发病原因、病理机制尚不十分明确。西医一般认为,其发生发展与雌、孕激素及其受体、生长因子、细胞凋亡、癌基因与抑癌基因、细胞免疫等有关[1]。中医多认为子宫肌瘤的发生与正气不足、瘀血内停有关,治疗多选用扶正祛瘀法,且效果显著。本研究旨在通过观察扶正祛瘀法的代表方——“理冲汤”对体外培养人子宫肌瘤细胞基因表达谱变化的调控为切入点,探讨理冲汤抑制肌瘤生长的分子机制,为临床治疗提供理论和实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 组织来源

    取自北京妇幼保健院行子宫肌瘤剔除术的患者,将切除的肌瘤组织部分送病理检查,选择肌瘤组织中间部分做子宫肌瘤原代细胞培养。该患者在手术前3 个月未接受过激素和其他药物治疗,术后病理诊断为肌壁间肌瘤。

    1.2 主要试剂和仪器设备

    DMEM 培养基(Gibco 公司,批号:NXCO586);胎牛血清(Hyclone 公司,批号:608759);0.25%胰酶(Hyclone 公司,批号:T1300-100);I 型胶原酶(Gibco 公 司);PBS 液(Hyclone 公 司,批 号:NYE0891);TRIZOL 试剂(Invitrogen life technologies,USA,批号:66314);GeneChip(r)PrimeViewTMHuman Gene Expression Array(Affymetrix,USA);GeneChip?3'IVT Express Kit(Affymetrix,USA);Gene-Chip ? Hybridization,Wash,and Stain Kit (Affymetrix,USA);RNA 提取试剂盒(QIAGEN);基因芯片洗脱工作站(GeneChip Fluidics Station 450);基因芯片杂交炉(GeneChip Hybridization Oven 645);基因芯片扫描仪(GeneChip Scanner 3000 7G);PCR 仪(ABI geneAMP? PCR system 7500)。

    1.3 药物血清制备

    1.3.1 材料 实验动物:3月龄SD 大鼠24 只 ......

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