宋芳娇 曾克武 屠鹏飞 王学美

    “肾主智，肾虚则智不足”是中医学的传统理论，研究室根据多年临床经验和“补肾以益智”的中医理论在古方五子衍宗丸基础上加淫羊藿形成加味五子衍宗方，其成分包括枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子和淫羊藿。据前期临床疗效和实验观察，加味五子衍宗方可有效改善轻度认知障碍患者的记忆功能，对海马体积的萎缩有一定的防治作用[1]。此外，加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖能提高东莨菪碱所引起的记忆获得障碍模型小鼠的胆碱能系统活性，提高学习记忆水平[2]。轻度认知障碍是阿尔茨海默病(alzheimer disease，AD)的早期临床表现。近年来，随着对AD研究的深入，许多学者认为AD是一种中枢神经系统慢性炎症性疾病，脑内炎症不仅能引起神经炎性损伤和神经元的退行性病变，还可能是其他病理特征(老年斑和神经元纤维缠结)形成和发展的诱因。本研究从抗炎角度出发，以脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导BV-2小胶质细胞系炎症模型为研究对象，探讨加味五子衍宗方及其活性部位对神经系统的保护作用和潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 BV-2小胶质细胞系购自中国医学科学院细胞中心。

    1.1.2 药物 枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、车前子和淫羊藿均购自北京同仁堂。

    1.1.3 试剂与仪器 胎牛血清(美国Gibco公司)、DMEM培养基(美国Hyclone公司)、NO化学法试剂盒(中国南京建成生物公司)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)、氯化硝基四氮唑蓝(nitrotetrazolium blue chloride，NBT)、溴化噻唑蓝四氮唑(thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT)、二氢乙锭(dihydroethidium，DHE)荧光染料、4'，6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(4'，6-Diamidino-2-phenylindole，DAPI)(美国Sigma公司)、兔抗大鼠iNOS，COX-2和β-actin多克隆抗体(美国CST公司)、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的羊抗兔 IgG(美国Vector公司)、电化学发光(electrochemical luminescence ECL)试剂盒(美国Pierce公司)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)(中国北京鼎国昌盛生物技术有限公司)、荧光显微镜(日本奥林巴斯公司)、2200 PRO凝胶成像分体系统(美国伊斯曼柯达公司)、Sunrise-Basic酶标仪(瑞士帝肯公司) ......