刘家昌 刘淑清 陈湘君 秦熠 汪蔚清

    类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是由于自身免疫系统病变引起的多系统炎症性疾病，本病多累及周围关节。其主要的病理变化在关节滑膜，而关节滑膜的病理变化是在滑膜细胞信号的调控下进行的，因此滑膜细胞信号的转导异常是本病的重要发病机制之一[1]。

    丝裂原活化蛋白激酶(mitagen-activated protein kinase，MAPK)途径是生物体内广泛介导细胞内及细胞间的多种生理反应过程的重要信号系统[2]，细胞外信号调节激酶 1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK 1/2)途径是 MAPK途径的重要组成部分。ERK 1/2可特异性地激活该途径，其广泛地存在于关节滑膜组织中，参与滑膜组织的信号转导过程。近年来的研究表明，ERK1/2途径的激活，是类风湿关节炎发病的重要机制之一。本实验通过观测益气补肾活血方对佐剂关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠 ERK1/2表达水平的影响，探讨该复方对类风湿关节炎的治疗机制和作用靶点。

    1 材料

    1.1 动物

    健康 SD大鼠60只，雌性，5周龄，体质量为(160±20)g，SPF级，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，使用许可证:SCXK(沪)2013-0006。实验动物由上海中医药大学附属普陀区中心医院实验动物中心负责饲养。

    1.2 药物

    雷公藤多苷片:购自黄石飞云制药有限公司，生产批号:20070601。益气补肾活血方:由生黄芪30 g、白芍 30 g、生白术 10 g、巴戟天 20 g、土鳖虫12 g、骨碎补15 g组成，大鼠中药用量按体表面积(200 g大鼠=70 kg人类)折算，中药灌胃制剂由上海中医药大学附属普陀区中心医院中药制剂室按既定工艺制作并提供。

    1.3 试剂和仪器

    RIPA组织裂解液(含有 PMSF，leupeptin，aprotinin等蛋白酶抑制剂)、BCA蛋白定量试剂盒、兔抗大鼠ERK1/2抗体等均购自美国Abcam公司，弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant，CFA)，购自美国Sigma公司，酶标仪，电泳仪，Image Scanner扫描仪，低温高速离心机(HERAEUS D-37520德国)。

    2 方法

    2.1 动物分组

    SD大鼠按随机数字表法分为6组:空白对照组、模型对照组、雷公藤多苷组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组 ......