王玲 吴秋枫

    丹参多酚酸对2型糖尿病肾病大鼠肾小管间质激活素A表达的影响研究

    王玲 吴秋枫

    目的采用高脂饮食加链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型，观察丹参多酚酸对其肾脏是否有保护作用及其保护机理。方法选取清洁级雄性SD大鼠50只，适应性喂养10天后随机分为正常组、糖尿病肾病组(模型组)以及丹参多酚酸低、中和高剂量治疗组，每组10只，模型建立成功后，正常组和模型组给予生理盐水0.1 mL/(kg·d)注射，丹参多酚酸低、中和高剂量分别给予丹参多酚酸10 mL/(kg·d)、20 mL/(kg·d)和40 mL/(kg·d)注射，8周后处死大鼠，检测血糖、胰岛素、24小时尿蛋白，同时HE染色观察肝脏病理学，免疫组化、Western blot和RT-PCR检测肾脏组织中肾小管间质激活素A(activin A，Act-A)的表达特点。结果与正常组相比，模型组血糖明显升高(P1 材料与方法

    1.1对象

    选用SPF级雄性SD大鼠[湖北中医药高等专科学校实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(鄂)2014-0017]，大鼠6周龄，体重180～220 g。大鼠购买后立即置于标准饲养间，适应性喂养期间由其自由饮水和饮食，控制明暗周期为12小时，温度保持在18～26℃之间，相对湿度控制65%～75%。

    1.2实验材料与试剂

    1.2.1 实验主要药品 链脲佐菌素(STZ)购于美国Sigma公司；丹参多酚酸购于天津天士力之骄药业有限公司。

    1.2.2 实验主要试剂 水合氯醛购于上海生化试剂公司；Scr试剂盒、血糖测定试剂盒、胰岛素测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；柠檬酸钠缓冲液自行配制；0.9%氯化钠注射液购于广西裕源药业有限公司；Act-A抗体、ECL发光试剂盒购于美国Santa公司，胶卷购于柯达公司，引物由上海英俊公司设计并生产。其他常规试剂由武汉科技大学附属天佑医院生化实验室病理科提供。

    1.3糖尿病大鼠模型的分组、制备与治疗

    所有大鼠在适应性喂养10天后随机分为正常组、模型组以及丹参多酚酸低、中和高剂量治疗组。除正常组给予普通饲料外，其余4组给予高脂饮水1个月，1个月后正常组给予一次性腹腔注射用柠檬酸缓冲液，其余4组给予55 mg/kg STZ溶液,一次性腹腔注射造模。72小时后，检测其血糖水平，当连续7天血糖值大于等于15.6 mmol/L时确定造模成功。造模成功后，正常组和模型组给予生理盐水0.1 mL/(kg·d)大鼠体重注射，丹参多酚酸低、中和高剂量组分别给予丹参多酚酸5 mL/(kg·d)、10 mL/(kg·d)和20 mL/(kg·d)注射治疗 ......