史默怡 韩宇博 刘莉

    益气温阳活血利水方为笔者团队治疗慢性心衰的经验用方，此方法在改善患者中医症候、心脏功能、临床症状方面具有很好疗效[1]。前期研究已经证明此方可以改善去甲肾上腺素致H9c2心肌细胞损伤和阿霉素致大鼠心衰模型心肌能量代谢[2-3]，为进一步探究机理，在前期基础上，本课题选用大鼠H9c2心肌细胞为实验对象，观察益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导心肌细胞凋亡以及对线粒体凋亡途径相关基因及蛋白的表达影响，为该药的临床应用提供客观依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株及动物

    H9c2大鼠心肌细胞来源于上海中科院细胞库；雄性SD大鼠45只，体重(200±20)g，购买于黑龙江中医药大学实验动物中心，动物许可证号：SCXK(黑)2015006，普通饲料喂养，适应环境2周后进入实验状态。

    1.2 实验药物

    益气温阳活血利水方：白人参20 g、黄芪20 g、桂枝10 g、丹参15 g、白术15 g、茯苓20 g、葶苈子15 g、益母草15 g、淫羊藿20 g、仙鹤草30 g、甘草10 g，购买于黑龙江中医药大学附属第一医院中药局。

    1.3 主要仪器

    倒置荧光显微镜(上海麦尚科学仪器有限公司)；酶标仪(上海申胜生物技术有限公司)；高速低温离心机(德国Sartorius公司)；-80℃超低温冰箱(中国海尔)；96孔板(美国Bio-Rad公司)。卡托普利干粉(1 g)(SIGMA，产地美国，分子量：217)。

    1.4 主要试剂

    Real-time PCR试剂盒(上海 Novland Co.Ltd )；血管紧张素II干粉(5 mg，SIGMA，产地美国，分子量：1046)1 mg溶解于10 mL PBS制成浓度为1×10-4mol/L的储存液，使用时1：100稀释，造模浓度为1×10-6mol/L，微孔滤膜滤过，分装，避光-20℃保存。卡托普利干粉(1 g，SIGMA，产地美国，分子量：217)0.217 mg溶于10 mL PBS溶液，使用时1：10稀释，有效浓度为1×10-5mol/L，微孔滤膜滤过，分装，避光-20℃保存。

    1.5 中药汤剂制备

    方剂中所有中药在蒸馏水浸泡2小时，操作时白人参切片，葶苈子包煎，煎煮2次，每次煮沸后再煎煮30分钟，纱布滤过，两次药液合并，水浴浓缩成每毫升含6 g生药的药液。

    1.6 含药血清制备 ......