赵鑫 陈思 王毅 刘洋 孙娅楠 何忠梅

    帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是继阿尔茨海默症之后的第二大神经退行性疾病，流行病学研究表明，在全世界范围内，PD患者在65岁以上人群中占1%～2%，在85岁以上人群中占4%～5%[1]。现代研究认为，PD发病部位在大脑黑质区多巴胺神经元丢失引起的体内多巴胺分泌量的降低，继而出现震颤、运动迟缓、肌肉僵直等一系列运动功能障碍。目前，临床上指导推荐药物多为左旋多巴为代表的复方多巴制剂及抗胆碱类药物[2]。但是多巴制剂仅能缓解发病，并不能从根本上治疗帕金森病。

    中医认为，鹿茸性温，入肝、肾经。鹿茸是迄今为止唯一发现的哺乳动物可再生附属器官[3]。现代药理学研究表明，鹿茸有很强修复再生能力。鹿茸不仅能够促血管再生[4]，还能促进表皮和成纤维细胞增殖及皮肤创伤愈合[5]。且大量研究表明，鹿茸对神经系统具有保护作用[6]。这为鹿茸用于治疗神经系统损伤性疾病提供了一定的理论依据。但现有的研究在肯定了鹿茸修复神经损伤作用的同时，并未对其毒性进行过系统研究[7]。本课题组前期得到一组可促进神经生长作用的鹿茸蛋白提取物。通过鹿茸蛋白提取物给药造模大鼠证实鹿茸蛋白提取物能够治疗大鼠帕金森病，并且研究发现鹿茸蛋白提取物中标记的蛋白成分可以透过血脑屏障[8]。而后给药损伤的SH-SY5Y细胞，发现鹿茸蛋白提取物可以保护神经细胞，促进神经细胞生长。本实验依赖于秀丽隐杆线虫(C.elegans)这一模式生物，从表型上观察到其对帕金森模型线虫A30P(以下简称A30P线虫)树突的修复作用，但是药物起药效作用的安全剂量范围尚需进一步研究。本实验在前期研究的基础上观察鹿茸蛋白提取物对A30P线虫生存率、生长发育、运动行为、树突恢复等方面的影响，探究鹿茸蛋白提取物的毒性及其药理学作用，筛选出最佳药效剂量范围。

    1 材料与方法

    1.1 实验药品

    梅花鹿鹿茸(购自吉林云鹿集团)，经中国中医科学院医学实验中心形态学实验室王毅研究员鉴定为梅花鹿(Cervusnippon)的鹿茸。

    1.2 线虫品系

    秀丽隐杆线虫A30P(Pdat-1::α-sny::GFP)、缺陷型大肠杆菌菌株(E.coli OP50)，均由日本Tomoki Kuwahara博士惠赠。

    1.3 实验试剂

    琼脂(国药试剂)、细菌蛋白胨(Oxoid)、叠氮钠(Sigma)、5-氟尿嘧啶(Sigma)、BCA蛋白试剂盒(碧云天)，其他所需化学试剂均购自国药集团化学试剂北京有限公司 ......