袁烁 陈敏红 邓高丕

    中医认为输卵管妊娠的发病机理与少腹素有瘀滞、冲任不畅、胞络受阻、孕卵移行受到阻滞、不能顺利进入胞宫有关，故中医对输卵管妊娠的治疗是以化瘀消癥杀胚为大法。宫外孕I号方(丹参、赤芍、桃仁)作为治疗异位妊娠的方剂，从1956年开始应用于临床[1]。研究团队在宫外孕I号方的基础上，加上了从现代药理研究角度对滋养细胞具有抑制作用的紫草[2]、天花粉[3]组成化瘀消癥复方。在前期开展了一系列复方治疗输卵管妊娠的机制探索，结果发现化瘀消癥复方可通过诱导FAS/FASL、Bcl-2/Bax凋亡通路[4-5]，促进相关蛋白的表达增加，而影响滋养细胞的凋亡程序；或通过对雌孕激素发挥拮抗作用[6]，对溶解输卵管蜕膜、引起绒毛及蜕膜组织的性质改变产生干扰；或通过干预细胞周期进程，上调增殖抑制率[7]；或呈浓度、时间依赖性地影响FAK信号通路表达，抑制滋养细胞迁移力[8]，进而起到抑制滋养细胞活性，阻滞输卵管妊娠进展的目的。本实验基于前期研究基础，着眼于PI3K/Akt/mTOR 信号通路，旨在探索化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞凋亡、侵袭影响的调控机制。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    化瘀消癥复方由紫草、天花粉、赤芍、丹参、桃仁各15 g组成，药物购自广州中医药大学第一附属医院药学部；甲氨蝶呤(广东岭南制药有限公司；批号：472004)；LY294002(RE-Vectec；批号：WXBC0225V)；雷帕霉素(rapamycin,Rapa)(RB-sigma；批号：92M4616V)；胎牛血清(Biological Industries；批号：1435272)；DMEM/F12培养基(Gibico；批号：8114362)；0.25%胰蛋白酶(Gibico；批号：1616025)；HBSS(1×)(Gibico；批号：C-0130)；Hanks(10×)(Sigma；批号：RNBC1413)；一抗p-AKT(R&D；批号：AF887)；一抗p-雷帕霉素靶蛋白(mammalian taget of rapamycin,mTOR)(Cell Signaling；批号：2983S)；Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒(上海贝博生物公司；批号：BB130031)；Transwell板(Corning；批号：3422)；Matrigel胶(Corning；批号：354277)。

    主要仪器：CO2培养箱：英国 NEW BRUNSWICK SCIENTIFIC 公司；低/高速离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司；细胞自动计数仪：美国 CELLOMETER 公司；全自动化学发光免疫分析仪：美国 Beckman 公司；脱色摇床：海门市其林贝尔公司；倒置荧光显微镜：日本 Nikon EclipseTi-s；流式细胞仪：美国 Beckman 公司 ......