李美 楼姣英 耿韦华 乔晓叶

    清毒栓是金哲教授研究多年并在临床上已取得较好疗效的中成药，临床主要用于治疗宫颈炎、宫颈人乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)感染、宫颈上皮内瘤变等，并取得了较满意的疗效[1-3]。前期课题研究发现清毒栓含药血清对SiHa细胞体外增殖有明显的抑制作用，可直接抑制SiHa细胞的生长、调节周期、促进凋亡，可能通过对阴道局部免疫微环境的调节作用，起到抗病毒的作用[2]，并可能通过调控PTEN-Mdm2-p53网络环路的分子机制，达到抑制肿瘤的目的[4-5]。本课题体内实验研究发现中药清毒栓灌胃处理可以显著抑制宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖并促进其凋亡，且浓度越高,疗效越显著；清毒栓能够上调干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)水平，降低转化生长因子-β1(transforming growth factor-β，TGF-β1)和白介素-10(interleukin- 10，IL-10)含量，可能逆转微环境中的免疫抑制[6]，从而具有一定的抗病毒作用。体外研究发现清毒栓通过调节叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead box P3,Foxp3)影响β-连环蛋白(β-catenin)通路从而抑制SiHa细胞的机制[7]。为进一步探究机理，在前期基础上，本实验以人宫颈癌SiHa细胞为研究对象，观察清毒栓含药血清对SiHa细胞凋亡途径相关基因及蛋白的表达影响，为该药临床应用提供更充足的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物及细胞株

    清洁级C57BL/6小鼠22只，日龄49天，购自三峡大学实验动物中心，许可证号：SCXX(鄂)，2017-0012。分笼饲养，温度24～26℃，相对湿度50%～60%，通风良好，每日光照12小时，昼夜交替；人宫颈癌SiHa细胞，购自中国医学科学院基础医学研究所。

    1.2 实验药物

    清毒栓(专利号：ZL 201010109562.1)，主要组成为紫草、莪术、黄柏等，均购自北京同仁堂药店，将复方药物分别醇提(紫草)、油提(莪术)、水煎(黄柏)，去渣后一副药浓缩至20 mL，终浓度约为4.2 g/mL，高温消毒后于4℃冰箱密封保存。

    1.3 主要仪器

    超净工作台(苏州净化设备有限公司，SW-CJ-1FD)；电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司，HW-SY11-KP2)；凝胶扫描仪(Beckmancoulter，CytoFLEX)；流式细胞仪(BD Biosciences ......