王丽琴 孙逸坤 王晓峰 李媛媛 宋珂 刘浩琦 常静玲 高永红

    《全球疾病，伤害和危险因素负担研究》表明2016年全球有8000万中风病例，死亡550万[1]。在我国，脑卒中患者中脑出血占28.2%[2]。血脑屏障是位于脑组织与外周血液循环之间的复杂细胞结构，在维持内环境稳态方面起到重要作用[3]。血脑屏障破坏是出血性中风的突出病理特征[4]。脑出血后会导致血脑屏障通透性增加以及功能障碍，其功能障碍引起的原发性损伤可能会破坏紧密连接及内皮细胞等的结构，导致潜在的神经毒性和血管活性化合物进入大脑，最终导致神经元细胞死亡[5-6]。

    研究发现，醒脑静注射液在治疗急性脑出血方面具有降压，维持水和电解质平衡，缓解炎症反应，神经保护等作用[7-8]。本研究采用胶原酶诱导的脑出血大鼠模型，结合病理、分子生物学等方法观察大鼠脑出血脑组织超微结构的改变及相应的病理变化，观察并检测脑出血后脑组织中血脑屏障的结构变化及相关蛋白的表达，探讨醒脑静注射液减轻脑出血后继发性损伤的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    实验中所用无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级健康雄性SD大鼠27只，体质量(270±20) g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0006。SD大鼠饲养于东直门医院实验动物中心，许可证号：SYXK(京)2015-0001，大鼠分笼饲养并给予充分食水。

    1.2 主要试剂与仪器

    醒脑静注射液(10 mL/支)：无锡济民可信山河药业股份有限公司(货号151107)；胶原酶VII：Sigma公司(货号C0773)；伊文思蓝(Evens blue, EB)：Solarbio公司; 二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)蛋白定量试剂盒、预染蛋白分子量marker、山羊抗兔免疫球蛋白G辣根过氧化物酶Goat anti-Rabbit IgG(immunoglobulin G，IgG)(H+L)HRP(horseradish peroxidase，HRP)、山羊抗小鼠免疫球蛋白G辣根过氧化物酶 Goat anti-mouse IgG(H+L)HRP：PPLYGEN公司。水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)、闭合蛋白(Occludin)一抗：Abcam公司；紧密连接蛋白(tight junction protein,ZO-1)一抗：Invitrogen公司；血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)一抗：Proteintech公司 ......