郑凌琦 黄文玲 刘艳霞 徐彩

    在有生育需求的高龄女性中，因卵巢衰老而出现的卵细胞质量下降是导致不孕及辅助生殖技术失败的主要原因。临床上，对高发育潜能、高受精能力、高胚胎发育能力的高质量卵母细胞的要求日益增加。面对高龄女性助孕需求，如何防治卵巢衰老、保护卵巢功能、改善生育能力成为了生殖医学界关注的热点问题，也是其治疗的重点难点。已有大量临床研究证明，中医治疗卵巢衰老相关疾病能取得良好的治疗效果，甚至恢复生育功能[1]，且中医药在辅助生殖技术中改善卵巢功能的作用逐渐被医学界认可。本研究采用未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)技术，探讨乌萸汤对体外培养的高龄小鼠卵母细胞能量代谢相关影响，进而证实乌萸汤促进卵母细胞成熟的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级C57BL/6J小鼠，雌性6周龄20只，体质量(18.5±0.6) g,24周龄60只，体质量(28.8±1.3) g；SPF级SD大鼠，雄性6周龄6只，体质量(150±20) g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2019-0010。以上动物均饲养于北京中医药大学东方医院实验中心动物屏障系统内，SPF环境，12小时/12小时，动物自由饮水摄食。

    1.2 主要实验药物、仪器与试剂

    乌萸汤药物组成：山茱萸10 g、乌药10 g、菟丝子15 g、丹参10 g、鸡血藤15 g、肉苁蓉10 g、香附10 g，北京中医药大学东方医院颗粒药房提供，康仁堂药业生产。

    超净工作台(苏州净化SW-CJ-1FD，中国)，CO2培养箱(SANYO XD-101，日本)，生物倒置显微镜(OLYMPUS，IX51，德国)，体式显微镜(世纪科信，中国)，台式低速离心机(上海医疗器械股份有限公司医疗设备厂，80-2，中国)，低温离心机(Sigma，3-30K，德国)，酶标仪(Thermo，MULTISKAN MK3)，荧光显微镜(OLYMPUS-IX51，德国)，PVDF膜(0.45μm，Millipore，IPVH00010)，电泳仪(北京百晶生物技术有限公司，BG-subMIDI)，SDS-PAGE电泳系统(BIO-Rad，美国)，脱色摇床(海门其林贝尔仪器制造公司，TS-100)。

    山茱萸环烯醚萜苷类提取物(上海陶素生物科技，登记号：131189-57-6)，孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)(宁波三生生物科技有限公司 ......