黄松丽 张琳婧 张秋艳 王媛媛 梁羽茜 胡秀华

    帕金森病是一种中枢神经性疾病，神经元的丢失与该病的发生发展密切相关。中医药可能通过针对不同致病因素的多重作用保护存活的多巴胺神经元[1]。牵正散和大补阴丸是中医临床常用的两个方剂，柴原等[2]研究表明牵正散和大补阴丸及其合方对小鼠脑神经有保护作用。此外，课题组前期研究发现6 μmol/L蛋白酶抑制因子I(proteasome inhibitor I，PSI)诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞可成功复制帕金森病体外细胞模型，而一定浓度的牵正散水煎剂能够改善PSI对该细胞的抑制作用[3]。本研究通过PSI对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocy-toma cells，PC12)进行诱导，复制帕金森病体外细胞模型，研究牵正散合大补阴丸水煎剂对该细胞模型细胞增殖、凋亡及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)含量的影响，检测牵正散合大补阴丸水煎剂对泛素/蛋白酶体途径中相关因子TBP1-19和PA28α蛋白表达的影响，确定牵正散合大补阴丸对帕金森病体外细胞模型的影响及作用机制，为中医临床治疗提供新思路和可靠依据，并为合方用药提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株

    大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocy-toma cells，PC12)，编号：3111C0001CCC000024，购于北京协和医学院基础学院细胞中心。该细胞为疏松贴壁细胞，以多角形为其形态特性，85% RPMI 1640和10% 胎牛血清以及5%马血清的完全培养基为其培养条件，于恒温恒湿(37℃，5%CO2)培养箱中培养。

    1.2 药物制备

    PSI(德国默克集团，批号：539160)粉末溶于DMSO中，配制为2 mmol/L的储存浓度，于-20℃冰箱避光分装保存。

    大补阴丸、牵正散两方剂药物购于北京同仁堂药业有限公司。依据常规煎煮方式将大补阴丸(熟地黄18 g、龟板18 g、黄柏12 g、知母12 g)水煎浓缩并经过无菌处理，以2 g/mL的水煎剂浓度4℃冰箱中保存备用(长期则保存于-20℃冰箱)。牵正散(白附子9 g、白僵蚕9 g、全蝎9 g)水煎剂的制备方式和储存浓度与之相同[3]。

    1.3 主要试剂

    Annexin-FITC/PI双染试剂盒(江苏凯基生物科技有限公司 ......