郑凌琦 刘艳霞 黄文玲 徐彩 赵嘉静

    由于生育年龄推迟以及全面开放“二孩”政策，有生育需求的高龄女性显著增多[1-2]，因卵巢衰老而出现的卵细胞质量下降是导致不孕及辅助生殖技术失败的主要原因。近年来，自然环境的污染，女性社会角色变化、精神压力的增加、妇科手术操作的增加等因素，卵巢储备功能下降(Diminished ovarian reserve, DOR)发病率呈逐年上升趋势[3]，这类患者在助孕促排卵过程中，容易发生卵巢低反应、卵母细胞数少等问题[4-5]。已有大量临床研究证明，中医治疗DOR往往能取得良好的治疗效果，甚至恢复生育功能，中医药在辅助生殖技术中改善卵巢功能的作用逐渐被医学界认可[6]。

    乌萸汤是国家级名老中医金哲教授经验方，以“补肾调肝”为法，临床收效显著。课题组前期研究显示，该方能够通过调整下丘脑—垂体—卵巢轴，有效改善卵巢功能，缓解临床症状[7-8]，还可影响高龄小鼠卵母细胞的线粒体功能，促进卵母细胞成熟。[9]本研究在此基础上，通过观察DOR小鼠促排卵情况及卵巢储备功能，探讨乌萸汤对DOR小鼠的治疗作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级C57BL/6J健康小鼠，其中雌性24周龄12只、6周龄6只，雄性6周龄3只。动物厂家许可证号：斯贝福(北京)生物技术有限公司，SCXK(京)2019-0010。以上动物均饲养于北京中医药大学东方医院实验中心动物屏障系统内，SPF环境，12小时明/暗，动物自由摄食饮水。

    1.2 试剂及实验器材

    主要试剂：妊马雌酮(宁波三生生物科技有限公司，S200808)，人绒毛膜促性腺激素(宁波三生生物科技有限公司，B200805)；精子获能液(Sigma，S7920)；人类输卵管液(Sigma，G5149)；抗缪勒管激素(anti miillerrian hormone，AMH)试剂盒(江莱生物，JL20476)；α-tubulin(CST，#5335)；Ki67(赛维尔生物，GB111141)；HRP标记山羊抗兔(赛维尔生物，GB23303)；CY3-山羊抗兔(赛维尔生物，GB21303)；FITC-山羊抗兔(赛维尔生物 ......