徐道立 林青 陈颖 李晶晶 佟庆

    多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是一种以内分泌紊乱为主、多种代谢异常导致的异质性临床综合征[1]，中国育龄期妇女中PCOS发病率达到6%～10%[2]，但其病因及发病机制目前仍未完全明确。SIRT1基因可通过调控多种下游蛋白表达及促进类固醇激素合成关键酶表达等多种途径影响PCOS发病[3]。归术益坤方是国医大师柴嵩岩治疗PCOS的经验方，主要以补肾健脾、养血通利为法，并以“二阳致病”理论为指导，运用补肺启肾之法，从而缓解脾肾不足、痰湿结聚的病理状态，促进卵巢功能恢复及月经来复。前期研究证实，归术益坤方能显著下调PCOS患者血清睾酮、黄体生成素(luteinizing hormone，LH)及卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，FSH)水平，改善相关症状，提高妊娠率[4]。细胞实验证实，归术益坤方能通过调控P53/AMPK通路影响卵巢颗粒细胞自噬，改善PCOS发病[5]。本研究旨在通过建立大鼠PCOS模型，以炔雌醇环丙孕酮片作为阳性对照药，探究归术益坤方对PCOS大鼠卵巢形态学、血清学及SIRT-FOXO通路相关蛋白的影响，进一步明确归术益坤方治疗PCOS的具体作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及实验环境

    SPF级健康雌性SD大鼠40只，4周龄，体质量(90±20)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号：SCXK(京)2016-0006。饲养于北京中医医院实验动物中心，温度(22±2)℃，相对湿度(70±2)%。动物实验符合北京中医医院伦理委员会相关规定。

    1.2 实验药物

    归术益坤方组成：菟丝子15 g、白术12 g、当归10 g、北沙参10 g、生麦芽10 g、茜草6 g、浙贝母15 g、蛇床子3 g。饮片购于北京中医药大学东方医院草药房。购买原药50剂，所有原药加10倍量水煎煮，共煎2次，每次1小时，合并滤液后浓缩，60℃减压干燥后得浸膏986 g(得膏率27.7%)，分瓶灌装密封后4℃冰箱冷藏保存备用。炔雌醇环丙孕酮片(拜耳医药保健有限公司，批号：20190630)购自北京中医药大学东方医院西药房。

    1.3 主要试剂与仪器

    丙酸睾酮注射液(宁波第二激素厂，批号20180624)，性激素Elisa试剂盒(Solarbio公司，批号20191123)，蛋白提取液(MDL公司，货号MDL91201) ......