张英琦 刘志凤 于天源 焦谊 王厚融 徐亚静 官乾 刘迪

    发热是儿童疾病最常见的症状之一，也是儿童入院的第二大常见原因[1]。小儿推拿治疗发热历史悠久，可追溯至隋唐时期，如《厘正按摩要术》：“小儿发热，有表里虚实之异……分阴阳，二百遍。推三关，一百遍……”，相关推拿手法一直沿用至今。小儿推拿通过体表干预激发体内的调节系统，患儿多不抗拒，舒适度高，临床效果良好。本课题组综合分析明清至现代小儿推拿专著及临床资料，最终选用穴位清晰、作用明确、应用广泛、便于操作的退热六法(开天门、推坎宫、揉太阳、揉耳后高骨、清天河水、推脊)作为干预方法进行研究。本研究采用大肠杆菌内毒素(lipopolysaccharides，LPS)注射方法制备幼兔细菌发热模型，旨在观察推拿退热六法对内毒素诱导发热幼兔的退热作用，探讨其作用机制，为进一步揭示临床小儿推拿退热的作用机制提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    2月龄清洁级新西兰雄性幼兔，体质量(2±0.5) kg，体温(39±0.5)℃，购于北京隆安实验动物养殖中心，动物生产许可证编号：SCXK(京)2019-0006。单笼饲养，饲料由北京中医药大学实验动物中心提供。购入后置于室温20～25℃、相对湿度为40%～60%的饲育室内，适应性饲养3日后，筛选基础体温均一的幼兔共24 只。本实验所有操作经过北京中医药大学IACUC的批准(BUCM-4-2020083102-3013)，并按实验动物使用的3R原则给予人道的关怀。

    1.2 药品及试剂

    脂多糖(美国Sigma公司，生产批号：0000081276)、生理盐水(石家庄四药有限公司，生产批号：2012141904)、BSA标准品(北京索莱宝科技有限公司，生产批号：20200817)、彩虹 245 广谱蛋白Marker(北京索莱宝科技有限公司，生产批号：1223C021)、三氯乙醛(上海麦克林生化科技有限公司，生产批号：C10323759)、BCA蛋白定量试剂盒(北京索莱宝科技有限公司，生产批号：20200903)、10×TBST (北京索莱宝科技有限公司，生产批号：20210311)、兔源COX-2抗体(北京博奥森生物技术有限公司，生产批号：AI06116399)、PGE2 ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，生产批号：20210101-72205A)。

    1.3 主要实验仪器 ......