杨朔 杨杰 章敬程 幺宝金 冷向阳

    中医“肾主骨”理论在防治骨疾病方面具有重要价值。肾主骨，治肾亦治骨，从肾论治骨科疾患是历代医家长期遵循的治病原则，一直以来对中医骨伤科临床实践起到了重要的指导作用。对于肾主骨相关机制的研究[1-4]和临床实践正在不断深入。骨痹止痛丸出自“天池伤科”流派第三代传人国医大师刘柏龄教授之手，是刘老以肾主骨理论为基础研发的颇具代表性的经验方。此方中含有淫羊藿、骨碎补等温补肾阳之要药，目前已制成长春中医药大学附属医院院内制剂。在临床实践中，课题组发现骨痹止痛丸对骨性关节炎等退行性疾病确有疗效，尤其适用于肾阳虚证者，但其具体作用机制尚未完全明确。本文旨在研究骨痹止痛丸调控肾阳虚大鼠软骨的作用机制，为骨痹止痛丸的临床应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级6周龄雄性大鼠30只，体质量(200±20)g，购自辽宁长生生物科技有限公司，实验动物许可证号： SCXK (辽) 2020-0001。 动物实验经长春中医药大学动物研究伦理委员会批准(批准编号：2021411)。动物自由饮水和进食，在温度(25±1)℃、湿度50%、12小时光照条件下饲养。

    1.2 实验药物

    本实验中所使用的骨痹止痛丸为长春中医药大学附属医院院内制剂(批号：吉药制字Z20170048)，由长春中医药大学附属医院提供。具体药物组成包括：淫羊藿15 g、骨碎补15 g、莱菔子6 g、鸡血藤10 g、锁阳10 g、熟地黄20 g、狗脊15 g。制备方法如下：将上述7种药物按固定比例进行混合，以蒸馏水浸泡(水面没过药材3 cm)；浸泡2小时后，用砂锅将药物和浸泡液煮沸30分钟，使用绢布过滤回收第一次所得药液，药渣留于砂锅内；再向砂锅中加入蒸馏水，继续沸水煎煮1小时，使用绢布过滤收取第二次所得药液，重复操作1次；将3次所得药液进行混合，通过旋转蒸发仪浓缩获得浸膏，4℃保存[4]。

    1.3 主要试剂与仪器

    大鼠联酶免疫吸附法(enzyme unked immunsoybent assay,ELISA)试剂盒(上海优选生物科技有限公司，批号：202006C)，总RNA提取试剂盒(BioTek公司，批号：11752053)，TRIzol Reagent(Invitrogen公司，批号：10296028)，苏木素染色液(珠海贝索生物科技有限公司，批号：BA-4097) ......