任文娟 赵晓燕

    三七主要用于活血化瘀、消肿止痛等,近来发现其主要药效成分三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)用于心脑血管疾病的治疗。 血栓通是中药三七的提取物,其主要成分为三七总皂苷,三七总皂苷中含多种单体皂苷成份。 血栓通注射液具有改善脑供血,增加脑灌注,抑制血小板聚集,降低血黏度等多种作用。 目前,血栓通注射液治疗脑卒中意见不统一。 有学者认为,血栓通注射液有助于脑卒中的恢复,如Meng LP 等[1]发现PNS 可通过miR-155 调控炎症因子的表达,减轻SH-SY5Y 细胞缺血再灌注损伤。 但还有一些学者对血栓通注射液的细胞保护作用持有相反意见,比如聂亚雄等[2]发现血栓通注射液治疗超早期大量脑出血时,可加剧早期脑水肿,引起大鼠神经功能缺损计分增加。 在哺乳动物中,存在三个高度保守的Hedgehog同源基因:SonicHedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh),它们分别编码Shh、Ihh 和Dhh 蛋白。 Shh 蛋白是一种细胞外的配体,Shh 通路上的启动蛋白。 细胞处于静止状态时,Shh蛋白与7 次跨膜受体Smo 蛋白结合,抑制Smo 活性,从而抑制其下游的反应。 当Shh 激活时,Shh 结合到12 次跨膜受体Ptch 蛋白上,解除Ptch 对 Smo的抑制作用,从而激活下游的Gli 家族蛋白,调节细胞周期进程、对抗凋亡、神经发生、细胞增殖和自我更新,参与损伤组织修复[3-4]。 近年来,Shh 通路在神经系统研究也颇多,如Jin 等[5]人发现Shh 激动剂激活Shh 通路可改善局灶性皮质缺血性损伤导致的行为缺陷。

    本实验运用神经母细胞瘤细胞(SY5Y)及小鼠大脑皮层神经元,进行AAPH 氧化应激损伤,并将神经元进行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)处理,模拟体外脑卒中,观察神经元氧化应激损伤及缺血缺氧的作用及对Hedgohog-Patched-Smoothened 信号通路的影响,探究血栓通注射液对脑卒中神经元的作用及可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物和细胞

    美国癌症研究所(institute of cancer research,ICR)SPF 级孕15 ~17 天小鼠,购自北京维通利华实验动物有限公司[许可证编号:SCXK(京)2012-0001]。 SC8 细胞、cyclopamine 为陈伟导师馈赠;感受态细胞为北京天坛医院李昊文老师馈赠 ......