周桂香 邓帅 班江文 陈雯雯 谭宝

    胃癌已经成为世界范围内的常见恶性肿瘤之一,其高发病率与死亡率不仅严重危害国民的生命健康,并且在很大程度上也给国家及社会的进步和发展带来沉重的疾病负担[1]。近年来,随着中草药不断进入人们的视野,越来越多的中草药及中药单体被发现在抗肿瘤中具有独特的作用和显著的优势,在抑制肿瘤增长的同时可以提高机体的免疫力,还可以增敏减毒,与化疗药配合使用起到协同增效的作用[2]。

    莪术,又称黑心姜、乌姜、姜七,为姜科姜黄属植物,功擅破血行气,消积止痛[3],主开胃消食,破积聚,行血瘀,除腹痛。现代药理研究发现,莪术挥发油具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗肿瘤的功效[4],课题组前期实验已经证实莪术挥发油能够通过诱导细胞凋亡和周期阻滞来发挥抗肿瘤的功效[4]。因此,本实验以莪术挥发油中所占含量比最多的单体成分莪术醇为实验对象,选取磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路为研究切入点,通过探讨莪术醇作用于胃癌AGS细胞后对该信号通路的影响,以期进一步阐明莪术醇抗肿瘤作用可能的机制,为今后的临床疾病治疗及新药开发提供相关实验数据。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    胃腺癌AGS细胞株,购于上海生命科学院细胞库。

    1.2 细胞培养

    将复苏后的胃癌AGS细胞在完全培养基中(含10%FBS、1%青-链霉素双抗)培养,放入5% CO2、37℃的恒温饱和湿度的培养箱,观察细胞生长情况,根据生长状态进行换液,细胞约铺满培养瓶底85%左右时,用0.25%的胰酶进行消化传代。

    1.3 主要药物与试剂

    莪术醇购于成都曼斯特生物科技有限公司(批号:MUST-20060802,质量标准为99.76%),将其溶于二甲基亚砜中,然后用全培进行稀释,使稀释后的二甲基亚砜终浓度≤5‰;顺铂注射液(江苏豪森药业集团有限公司,批号:601210605,规格:6 mL∶30 mg);胎牛血清(杭州四季青有限公司,批号:21090706);DMEM培养基(批号:MA0212)、0.25%胰酶(批号:MA0232)、PBS溶液(批号:MA0015)、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(批号:Jan-18G)均购于大连美仑生物技术有限公司;细胞周期试剂盒(批号:A10734)购于联科生物公司;CCK-8检测试剂盒(批号:SC119-02)购于大连美仑生物技术有限公司;B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)抗体(批号:3560006120)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)抗体(批号:3560138106)、β-actin抗体(批号:2021040708)购于武汉ABclonal公司;PI3K抗体(批号:ab151549)、p-Akt抗体(批号:AF0908)、p-mTOR抗体(批号:CST-5536)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)抗体(批号:GB11767c)均购于武汉塞维尔生物科技有限公司;增强型RIPA裂解液(批号:16128C02)、BCA蛋白浓度测定试剂(批号:16H10A46)、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(批号:16J20B12)、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(批号:16J27C38)均购于博士德生物有限公司 ......