梁光萍 高玲 陈晓兰 张宁 罗乐 李嘉

    腹水是肝硬化由代偿期进入失代偿期的典型并发症之一,一旦腹水形成,患者第1年和第5年的病死率分别约为15%和44%～85%[1]。腹水发病机制尤为复杂,与门脉高压、血浆胶体渗透压降低、淋巴液增多、醛固酮系统活性增强等有关[2],其中门脉高压被认为是导致肝硬化腹水形成的始动和关键因素。而在门脉高压中,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是门脉高压形成的中心环节[3-4],故诱导活化的HSC发生凋亡,是治疗肝硬化腹水的一个重要靶点。

    马兰草为菊科植物,民间道地药材,有抗炎、镇痛、保肝等作用,其味辛性寒、凉,有清热解毒、理气消肿、凉血、利湿功效。课题组前期通过临床研究初步发现采用口服健脾活血祛湿方联合马兰草脐灸,能改善肝硬化腹水患者肝功能指标和腹水量,缓解腹胀等[5]。基础研究方面,采用马兰草脐灸治疗肝纤维化模型大鼠能有效改善肝纤维化程度[6-7],且在体外实验中验证了马兰提取物对活化的HSC-T6有促凋亡的功效[8]。鉴于前期研究成果,本研究将马兰草制备成凝胶贴剂,以贴敷脐疗法为干预方法,通过观察肝硬化腹水大鼠的一般情况、腹水量改变、肝组织病理变化、及相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X,Bax)因子的表达变化,探索治疗肝硬化腹水大鼠可能存在的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及实验环境

    60只SPF级健康Wistar雄性大鼠,6周龄,体质量180～200g,购自长沙市天勤生物技术有限公司,合格证号:SCXK(湘)2019-0014。自由饮水饮食,12小时/12小时的光暗循环,环境温度(22±3)℃,相对湿度(50±10)%。

    1.2 实验药物

    马兰草采摘于贵州毕节,经贵州中医药大学生药实验室田源红教授鉴定为菊科植物马兰[Kalimerisindica(L.)Sch-Bip]的带根全草。称取马兰草粉末200 g(过3号筛),加10倍量70%乙醇回流取3次,浓缩液浓度为0.1 g/mL(以生药计),洗脱剂采用95%乙醇,1 BV/h的速度洗脱,得到纯化物备用。以NP-700(0.009 7)∶甘油(0.548 5)∶纯水(0.347 5)∶Al(OH)3(0.011 0)∶酒石酸(0.003 5)∶薄荷脑(0.013 2)的配比,制备基质,加入13.37 g的马兰纯化物进行配置,充分搅拌均匀,静置30分钟以备用[9] ......