宋纪显 陈琦 杨新栎 安继仁 赵亚硕 吉恩生

    阻塞性呼吸睡眠暂停(obstructive sleep apnea,OSA)可引起慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH),诱导小鼠心肌损伤和心脏功能障碍[1]。CIH主要的病理特征是反复低氧/复氧循环,引起活性氧(reactive oxygen species,ROS)升高和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)进而导致心肌细胞凋亡[2-3]。内质网应激与多种心血管疾病密切相关,持续高水平存在会激活未折叠蛋白反应,造成细胞功能障碍和凋亡[4]。本课题组前期研究证实半夏厚朴汤可通过减少铁沉积,抑制氧化应激和线粒体损伤,进而减轻CIH引起的心脏损伤[5-6],同时有研究发现CIH可以激活ERS导致主动脉血管重构[7],但是半夏厚朴汤是否可以通过抑制ERS反应发挥心脏保护作用尚不明确。因此为了进一步探讨CIH引起心脏损伤的具体机制以及寻找半夏厚朴汤发挥心脏保护作用的其他潜在机制,课题组建立小鼠CIH模型,并观察ERS在其中的作用以及半夏厚朴汤对ERS的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    C57BL/6N小鼠(SPF级,雄性),8周龄,体质量(20±2)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号: SYXK[冀]2017-005,于河北中医药大学科研中心动物中心进行饲养。该实验已通过河北中医药大学伦理委员会审查(动物伦理编号:DWLL2020044)。

    1.2 主要药品与试剂

    半夏厚朴汤所用中药饮片均购自河北神威药业有限公司,处方:半夏12 g、厚朴9 g、茯苓12 g、生姜15 g、苏叶6 g。

    RIPA裂解液(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号:G2002)、蛋白酶抑制剂(Thermo Scientific,货号:A32955)、Tween-20(北京索莱宝科技有限公司,货号:9005-64-5)、BCA试剂盒(CoWin Biosciences,货号:CW0014),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、过氧化氢酶(catalase, CAT)试剂盒(南京建成,货号:A001-1、A007-1、A003-1)、TUNEL试剂盒(Vazyme Biotech,货号:A112)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)抗体(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号:GB11098)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein, CHOP)抗体(华安生物,货号:ET17030)、内质网氧化还原1样蛋白(endoplasmic reticulum oxidoreductin-1-like protein, ERO1L)抗体(Bioss公司,货号:bs-10551R)、GAPDH抗体(武汉赛维尔生物科技有限公司,货号:GB15002) ......