塞来昔布联合卡介苗治疗大鼠膀胱肿瘤的实验研究(1)
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[摘要]目的：观察联合应用塞来昔布与卡介苗治疗大鼠膀胱肿瘤的疗效，并探讨其机制。方法：选用5～6周龄雌性Wistar大白鼠40只，随机分为4组，即PBS组、塞来昔布组、卡介苗组、塞来昔布+卡介苗组。均采用膀胱灌注MNU(N-甲基亚硝基脲)制成大鼠膀胱肿瘤模型，于灌注MNU后第10周开始给予相应的药物干预治疗，于第13周处死所有大鼠，观察膀胱肿瘤的形成情况，免疫组织化学检测肿瘤组织中的CD3+、CD4+、CD8+细胞的浸润情况，TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数(apoptotic index,AI)。结果：联合用药组CD3+、CD4+、CD8+细胞浸润百分比及肿瘤细胞AI值与其他组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：联合应用塞来昔布和卡介苗比单纯使用卡介苗或塞来昔布能更加明显地抑制大鼠膀胱肿瘤的生长，其机制可能是通过促进免疫系统的功能和诱导肿瘤细胞凋亡增加而发挥作用的。
[关键词] 膀胱肿瘤；塞来昔布；卡介苗
[中图分类号] R737.1 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2009)05(a)-025-03
, 百拇医药
Effect of BCG combined with celecoxib on the animal model of bladder tumor
LIU Yanbin1,MI Zhenguo2*,YANG Xinjing1,REN Liansheng2
(1.The First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China；2.Shanxi Tumor Hospital,Taiyuan 030013,China)
[Abstract] Objective: To observe the effect ofCelecoxib combined with BCG on the Wistar rats model of bladder tumor and discuss the mechanism of the therapeusis. Methods: Separated forty female 5-6 week-old Wistar rats into four groups: PBS groups, Celecoxib groups, BCG groups, Celecoxib+ BCG groups randomly. All the rats were irrigated MNU(M-methyl-N-nitrosourea) into their bladders to make of the bladder tumor models. Treatment took place on tenth week after irrigated MNU, four groups were irrigated corresponding drug into bladders; at thirteen week executed all rats, observed the development of bladder tumor, detected infiltrating condition of CD3+, CD4+, CD8+ cells in tumor tissues with immunohistochemistry, detected apoptosis condition of tumor cells with the method of TUNEL. Results: Celecoxib+ BCG groups compared with the other groups，the difference of the infiltration percentage of CD3+, CD4+, CD8+ cell and the degree of tumor cell apoptosis has statistical significance(P<0.05). Conclusion: Combined Celecoxib and BCG can be more conspicuous inhibition of tumor growth of rat bladder than the use of celecoxib or BCG alone, The mechanism is maybe that promoting the function of immune system and increasing tumor cells apoptosis.
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[Key words] Bladder tumor; Celecoxib; BCG
膀胱肿瘤是泌尿系统中最常见的肿瘤，90%以上为移行上皮细胞癌，大部分为浅表性膀胱癌,除了用手术治疗以外，还须辅以抗肿瘤药物膀胱内灌注治疗，但有一定的复发率和应用药物的副作用，其中卡介苗是主要的治疗药物。本研究采用MNU膀胱灌注诱导建立大鼠膀胱肿瘤模型，用塞来昔布和卡介苗单独和联合用药，评价其疗效，以寻求更安全有效的膀胱肿瘤药物联合治疗方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及主要试剂
5～6周龄Wistar雌性大鼠，由河北医科大学实验动物中心提供；MNU由美国Sigma公司生产；冻干卡介苗购自上海生物制品研究所；塞来昔布由美国辉瑞公司生产。
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1.1.2 试剂的配制
MNU溶液：用pH 6.0的0.1 mol/L枸橼酸缓冲液为溶剂，将MUN配成浓度为20 mg/ml的溶液，每只大鼠用量0.1 ml。BCG溶液：50 mg/支冻干卡介苗溶于5 ml生理盐水中，每只大鼠用量0.1 ml。塞来昔布:每只大鼠用量100 mg/kg，按大鼠体重确定其用量，溶于2 ml生理盐水中。
1.2 方法
1.2.1 膀胱肿瘤大鼠模型的制备
40只大鼠造模过程：灌注前腹腔内注射0.6%的戊巴比妥钠麻醉动物，剂量为2.5 ml/kg。起效后仰卧固定，0.1%的碘伏消毒尿道外口后，用5 cm硬膜外导管导尿排空膀胱后，接上带有6号半针头的1 ml注射器按计划向膀胱内注入0.1 ml MNU溶液，每2周1次，共5次。
, 百拇医药 1.2.2 分组及处理
于第10周，将40只大鼠随机分为4组：PBS组，塞来昔布组、卡介苗组、塞来昔布+卡介苗组，每组10只。开始给予药物干预治疗，分别给予0.1 ml PBS、100 mg/kg塞来昔布、0.1 ml 卡介苗、100 mg/kg塞来昔布+0.1 ml卡介苗，PBS 与卡介苗采用膀胱灌注给药，每周1次，共3次，塞来昔布采用灌胃给药，每天1次，共3周。
1.2.3 标本处理
1.2.3.1 病理切片观察：于第13周采用断颈法处死大鼠，解剖膀胱，完整切取膀胱，于膀胱前壁剖开，观察膀胱内表面及肿瘤形成的大体情况；在病变明显处切取部分肿瘤组织，置于中性福尔马林溶液中固定24 h，常规石蜡包埋，4 μm切片，HE染色，显微镜下观察。, http://www.100md.com(刘彦斌 米振国 杨新晶 任连生)