视神经星状胶质细胞的培养
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顾蓓 刘玉琴 张永鹏 张宏 王春景 苏小玲 董继红 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院;
【摘要】目的:探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法,观察该细胞体外水解酶表达情况。方法:分别取不同年龄WISTAR大鼠(出生4 d、7 d、成年)的视神经,利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化,分别接种在0.2%明胶、鼠尾胶、多聚赖氨酸包被的培养瓶中,进行原代培养,观察细胞生长状况。利用免疫组化鉴定分离培养的细胞。连续传代观察其衰老情况。利用水解空斑法观察其水解酶表达。结果:几种方法均可见细胞生长,年龄4、7 d大鼠视神经要比成年大鼠视神经胶质细胞培养成功率高,利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化要比其他消化方法细胞损失小,速度快,细胞成活率高。培养细胞呈典型星状胶质细胞形态,GAFP呈阳性。常规3 d传代一次,可传代40次。胶质细胞在蛋白膜上可形成明显的水解空斑。结论:利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化法,从新生鼠取材,可成功培养视神经星状胶质细胞,体外可传代40代。该细胞在体外可分泌蛋白水解酶。
【关键词】 星状胶质细胞 GAFP 大鼠
【分类号】R329.24
视神经周围的星状胶质细胞,在眼部多种疾病发生中起重要作用。利用培养的视神经星状胶质细胞在研究药物作用机理及将来筛选新药中有重要意义。本文拟建立视神经星状胶质细胞培养方法,为该细胞在科研中进一步应用奠定基础。1材料与方法1.1动物用4～7 d的新生及成年Wistar大鼠,
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[摘要]目的：探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法，观察该细胞体外水解酶表达情况。方法：分别取不同年龄WISTAR大鼠(出生4 d、7 d、成年)的视神经，利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化。分别接种在0.2%明胶、鼠尾胶、多聚赖氨酸包被的培养瓶中，进行原代培养，观察细胞生长状况。利用免疫组化鉴定分离培养的细胞。连续传代观察其衰老情况。利用水解空斑法观察其水解酶表达。结果：几种方法均可见细胞生长，年龄4、7 d大鼠视神经要比成年大鼠视神经胶质细胞培养成功率高，利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化要比其他消化方法细胞损失小，速度快，细胞成活率高。培养细胞呈典型星状胶质细胞形态，GAFP呈阳性。常规3 d传代一次，可传代40次。胶质细胞在蛋白膜上可形成明显的水解空斑。结论：利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化法，从新生鼠取材，可成功培养视神经星状胶质细胞，体外可传代40代。该细胞在体外可分泌蛋白水解酶。
[关键词]星状胶质细胞；GAFP；大鼠
[中图分类号]R329.2+4 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2009)05(b)-033-03
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