酸-醇法从猪肺中提取胰岛素的研究
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[摘要] 目的:探讨酸-醇法从猪肺中提取胰岛素的研究方法。方法:将猪肺破碎后在低pH值溶液中,使胰岛素分子处于单体状态,利用酸-醇液将其萃取分离,通过盐析将其析出后进行分离纯化。结果:去除杂质蛋白、阴阳离子、热原性物质等,可得到胰岛素晶体,收率近0.006%。结论:从动物体内提取胰岛素,可用于人体降糖的特效药物,尤其是猪胰岛素与人胰岛素相近,对猪内脏器官有效开发,增加胰岛素生产原料来源,有一定研究价值。除了猪胰脏中含有丰富的胰岛素外,猪肺中也含有微量胰岛素。
[关键词] 胰岛素;萃取;盐析
[中图分类号] R-33 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)05(b)-016-02
The study of acid-alcohol method to extract insulin from the lung
SONG Xiaopei
(Mudanjiang University, Heilongjiang Province, Mudanjiang 157011, China)
[Abstract] Objective: To investigate the acid-alcohol method to extract insulin from the lung. Methods: The lung at low pH value after breaking solution to the insulin molecules in a single state, the use of acid-alcohol to extraction, precipitated by salting after its purification. Results: Remove protein impurities, ions, pyrogenic substances, available insulin crystals, almost 0.006% yield. Conclusion: Insulin extracted from animals can be used to hypoglycemic effects of human drugs, especially porcine insulin and human insulin is similar to the effective development of pig organs to increase the insulin production of raw materials, certain research value. Apart from pig pancreas is rich in insulin and the lung also contain traces of insulin.
[Key words] Insulin; Extraction; Salt
从动物胰脏中提取胰岛素是生物胰岛素生产的主要途径,且动物与人的胰岛素分子结构大致相同,因此,从动物体内提取胰岛素可用于人体降糖的特效药物[1-2]。尤其是猪胰岛素与人胰岛素相比,只有B30位的1个氨基酸不同,人的是苏氨酸,猪的是丙氨酸,其抗原性比其他来源的胰岛素要低。因此,猪胰脏已成为我国目前临床应用的胰岛素生产的主要原料来源[3]。据报道,猪肺中仍含有微量胰岛素,如果能有效提取,对于猪内脏器官开发利用,增加胰岛素生产原料来源具有一定的研究价值[4]。
1 材料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 新鲜猪肺:猪体内取出2 h内处理。
1.1.2 硫酸:2.5 mol/L,生产厂家:哈尔滨市新达化工厂,产地:哈尔滨,生产批号:20050620。
1.1.3 硫酸铵、分析纯,生产厂家:天津市博迪化工有限公司,产地:天津,生产批号:20060805。
1.1.4 强碱性季铵Ⅰ型阴离子交换树脂201×7。
1.1.5 强酸性苯乙烯阳离子交换树脂001×7。
1.1.6 丙酮、分析纯,生产厂家:天津市博迪化工有限公司,生产批号:20080410。
1.2 器材
1.2.1 组织绞碎机,型号:FW100型,额定功率:50 HZ,转速:2 400 r/min。
1.2.2 离心机(沉降式),型号RH80-2,生产厂家:上海逸龙科技有限公司。
1.3 方法
1.3.1 酸解:将新鲜猪肺用绞碎机破碎成泥状,加入5倍的水搅匀,用2.5 mol/L硫酸调节pH值到2,搅拌提取8 h后过滤。滤渣再用68%～70%乙醇和0.4%草酸提取2 h后分离,合并提取液[4-5]。
1.3.2 盐析:提取液中加硫酸铵盐析,加入量为277 g/L,不断搅拌,用5 mol/L硫酸调节pH值到1.5,放置12 h后过滤。滤液用氢氧化钠调节pH值到5.5,按225 g/L的量加入硫酸铵盐析,48 h后过滤,将2次滤得的沉淀物合并。将沉淀物用9倍的水溶解搅拌2 h,在冰箱中放置12 h后过滤,滤液中加入1/20倍50%三氯乙酸,快速加热至80℃,再冷却至30℃过滤(除去杂质蛋白),滤液用5 mol/L氢氧化钠调pH值至3,按610 g/L的量加入硫酸铵盐析,2 h后过滤,沉淀物用醋酸钠-硼酸缓冲液溶解,再按1 050 g/L的量加入硫酸镁盐析12 h,过滤取沉淀物[6]。
1.3.3 纯化:沉淀物用4倍水溶解搅拌,装入透析袋中,将透析袋放入10℃流动水中透析24 h。用硅藻土过滤,滤液中加入树脂搅拌20 min至无SO42-,过滤。滤液中加入0.9%的氯化钠和1.5倍量丙酮,析出沉淀,过滤 ......
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