消炎利胆片含量测定的方法学验证
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[摘要] 目的:对消炎利胆片中脱水穿心莲内酯的含量测定方法进行验证。方法:反相高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为甲醇-水(55∶45);柱温为35℃;检测波长为254 nm,流速为1.0 ml/min。结果:脱水穿心莲内酯在0.122 0～0.406 4 mg/ml范围内有良好的线性关系,r=0.999 9,平均加样回收率为98.7%(n=6),RSD=0.75%。结论:该法分离效果好,结果准确、可靠,可对消炎利胆片含量进行测定。
[关键词] 消炎利胆片;脱水穿心莲内酯;含量测定;高效液相色谱法
[中图分类号] R286.0 [文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2010)06(a)-058-02
消炎利胆片为《中药成方制剂》第十册收载的品种,由穿心莲、溪黄草、苦木三味中药经加工精制而成,具有消炎、祛湿、利胆等功效。其主要药味穿心莲,是抗菌消炎的主要成分,其化学成分为穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯等多种内酯类化合物,脱水穿心莲内酯为含量测定指标[1]。笔者依据《中国药典》2005年版第一部(附录ⅩⅧA)中药质量标准分析方法验证指导原则[2]对消炎利胆片含量测定方法进行了验证,现将测定的方法学验证经验报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 仪器shimadzulc-2010A高效液相色谱仪,SLASS-VP色谱工作站(日本岛津公司),BP211-Dsartorius电子天平(赛多利公司)。
1.1.2 试剂纯净水(娃哈哈),甲醇(色谱纯,美国Fisher公司),乙醇(分析纯,天津化学试剂三厂),正己烷(分析纯,天津化学试剂三厂),中性氧化铝(层析用,200～300目,上海市五四化学试剂有限公司)。
1.1.3 样品消炎利胆片(云南滇中药业有限公司生产)批号:20090101、20090102、20090201、20090202、20090203、20090204。
1.1.4 对照品脱水穿心莲内酯(中国药品生物制品鉴定所提供,0854-200204)
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱;填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶;流动相:甲醇-水(55∶45);柱温:35℃;检测波长:254 nm;流速:1.0 ml/min;进样量:5 μl。理论塔板数按脱水穿心莲内酯峰计算应不低于2 000。
1.2.2 对照品溶液的制备取脱水穿心莲内酯对照品约20.32 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度作为对照品贮备溶液。
1.2.3 供试品溶液的制备取消炎利胆片20片,除去糖衣,精密称定,研细,取约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50 ml,浸泡过夜,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液10 ml,用正己烷振摇提取3次,每次10 ml,弃去正己烷提取液,将乙醇蒸干,用5 ml甲醇溶解残渣,加在中性氧化铝柱(4 g,层析用,200～300目)上,用甲醇15 ml洗脱,收集洗脱液,回收甲醇至干,用甲醇溶解残渣,转移至5 ml量瓶中并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.5 μm)过滤,取滤液,即得。
2 结果
2.1 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液3、4、5、8、10 ml置10 ml容量瓶中,分别加甲醇稀释至刻度,配制成系列浓度的对照品溶液,在上述色谱条件下,测定峰面积以对照品浓度作横坐标(X),峰面积作为纵坐标(Y),线性回归方程Y=2.005 5×107X-2.096 9×106,r=0.999 9,表明脱水穿心莲内酯在0.122 0～0.406 4 mg/ml范围内具有良好线性关系。见表1。
2.2 专属性试验
按处方比例,取去除穿心莲的其他药味,按生产工艺制备得阴性样品,并依“供试品溶液的制备”项下,同法处理后,制得阴性空白对照液,按前述色谱条件,分别对空白对照液、供试品溶液、对照品溶液各进样5 μl,测定。结果:在空白对照色谱中,脱水穿心莲内酯峰处无其他药物干扰。
2.3 重复性试验
称取批号为20090101的样品6份,照“供试品溶液的制备”项下方法进行处理。分别测定脱水穿心莲内酯的含量(表2)。结果:平均含量为每片1.46 mg,RSD=1.12%, 重复性良好。
2.4 准确度试验
对照品溶液:取脱水穿心莲内酯对照品5.002 mg,置50 ml容量瓶中,加乙酸乙酯溶解,并定容至刻度,摇匀。取重复性项下批号为20090101的样品6份各约1 g,称定样品加瓶的重量,分别精密加入上述脱水穿心莲内酯对照品溶液5 ml,照“供试品溶液的制备”项下的方法进行处理,取滤液5 μl,按上述色谱条件进样,进行测定(表3),测得平均回收率为98.72%,RSD=0.72%。
2.5 稳定性试验
精密吸取对照品贮备溶液5 ml置10 ml容量瓶中(含脱水穿心莲内酯0.203 2 mg/ml),分别于0、2、4、6、8、16、24 h进样,测定峰面积(表4),结果RSD为0.17%,可见供试品在24 h内稳定 ......
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