血吸虫病的免疫学检验方法分析
 |
| 第1页 |
参见附件(1480KB，2页)。
[摘要] 目的：分析总结血吸虫病的几种免疫学检验方法，从而提高血吸虫病的免疫学诊断准确率。方法：以血吸虫尾蚴和虫卵作为抗原的尾蚴膜试验和环卵沉淀试验。结果：本实验具有较高敏感性。结论：检测血吸虫的各种试验成为临床辅助诊断的有效手段，在流行病学调查中尤具重要作用。
[关键词] 血吸虫病；免疫学检验；细胞
[中图分类号] R532.21 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721(2010)10(c)-070-02
在血吸虫病的免疫学诊断中，除试用过几乎所有的各种免疫学检验方法外，还有以血吸虫尾蚴和虫卵作为抗原的尾蚴膜试验和环卵沉淀试验。敏感性、特异性较高且使用广泛的主要的试验方法有皮内试验、环卵沉淀试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。
1 资料与方法
1.1 一般资料
为Ⅰ型变态反应试验。当经皮内注入血吸虫抗原时，抗原与相应IgE抗体结合，引起肥大细胞和嗜碱粒细胞脱颗粒，释放组织胺使毛细血管扩张，血管壁通透性增强，出现丘疹和红晕等反应。成熟虫卵内毛蚴的分泌排泄物具有良好的抗原性，它从虫卵内渗出后；如与血吸虫感染者的血清作用时，可在虫卵周围形成特异性沉淀物。用可溶性血吸虫卵抗原致敏的绵羊红细胞与患者血清中的相应抗体，可呈现凝集反应。同间接ELISA，用日本血吸虫卵可溶性抗原包板，检测血清标本中的抗体。
1.2 方法
1.2.1 国内供应的血吸虫皮试抗原
有2种。一种为1∶8 000成虫干粉冷热浸抗原，另一种为1∶3 000新鲜成虫匀浆抗原。按无菌操作用结核菌素注射器，26号皮试针头于受试者前臂屈侧面注入血吸虫抗原0.03 ml。亦可用一直径0.5 cm的印章在前臂做一印记，注入抗原布满整个圆面积，注射量相当于0.03 ml。15 min后观察结果，测量丘疹的最大直径，凡等于或大于0.8 cm即为阳性反应[1]。
1.2.2冰冻干燥或热处理超声血吸虫卵
国内有成品供应。
1.2.2.1 用熔化的石蜡在洁净的载玻片上划两条相距约20 mm的直线，在蜡线之间滴加受试者血清2滴。
1.2.2.2 用针尖挑取干卵100～150个加入血清中，混匀，覆盖24 mm×24 mm盖玻片，盖玻片四周围石蜡密封。
1.2.2.3 置37℃温箱内48 h后，用低倍显微镜观察反应结果。如可疑阳性应在高倍显微镜下鉴别。
1.2.2.4 结果判读，典型的阳性反应是在虫卵周围出现泡状、指状或细长卷曲的带状沉淀物，边缘较整齐，有明显的折光。泡状沉淀物须大于10 μm(约相当2个细胞大小)。①反应强度用Ⅰ～Ⅲ表示：Ⅲ表示虫卵周围出现泡状沉淀物的面积大于虫卵面积，带状沉淀物相当于或超过虫卵长径的2倍。Ⅱ表示虫卵周围出现泡状沉淀物的面积大于虫卵面积的1/2，带状沉淀物相当于或超过虫卵的长径。Ⅰ表示虫卵周围出现泡状沉淀物的面积小于虫卵面积的1/2，带状沉淀物小于虫卵的长径。②阴性反应：虫卵周围光滑无沉淀物，或有小于10 μm的泡状沉淀物及不论大小的球状及影状沉淀物[2]。阳性反应标本片要观察100个成熟虫卵，记录出现反应的卵数和反应的强度(计算环沉率，阴性者必须看完全片)。
1.2.3 商品化致敏红细胞试剂
国内有相应的供应。操作方法：严格按试剂盒说明书操作。①用微量滴管加4滴(25 μl/滴)0.9%氯化钠溶液于U型微量血凝板第一排、第二孔内，第三孔空白，第四孔加1滴。②第一孔内加待检血清，混匀，从中吸取血清1滴加入第二孔内，充分混匀后吸出2滴，于第三孔和第四孔各加1滴，在第四孔混匀后弃去1滴，使第三孔和第四孔血清稀释度为1∶5和1∶10。③将冻干致敏红细胞试剂按说明书用蒸馏水稀释后；用定量吸管吸取致敏红细胞悬液，于第三孔和第四孔各加1滴(25/μl)，立即旋转震摇2 min，室温下静置1 h左右，观察结果。④判读标准同一般间接血凝试验，以血清大于或等于1∶10稀释出现阳性反应判为血吸虫病患者。
1.2.4 ELISA
①包被抗原，国内有成品供应。②其余试剂同一般ELISA。操作方法：同间接ELISA，原则上用1∶3 000稀释的1%日本血吸虫可溶性虫卵粗抗原包被聚苯乙烯板，每孔200 μl，置4℃过夜，洗涤后，分别加用吐温-PBS作1∶200稀释的血清标本，阴、阳性参考血清每孔200 μl。每个标本至少作双份。对照组不加血清，仅加PBS吐温，保温洗涤后，加适当稀释的酶标记抗人IgG，每孔200 μl。再经保温洗涤后，按常规加底物显色后，用酶标比色计，读取A492值。以4份邻苯二胺(OPD)底物及1份2 mol/L硫酸的混合液校正零点[3]。
2 结果
①加入虫卵数量要适当，虫卵过多或过少对反应结果都有一定影响。计算虫卵时，均不计未成熟卵和破卵。②检验每批血清标本，应同时做一阳性血清对照。③本试验可用于滴血滤纸代替血清进行反应；但将血滴洗脱时，血液被稀释反应强度因而下降。在我国一般不推荐干血滤纸方法乙目前有采用热处理超声干卵，PVC薄膜片环卵反应以及双面胶纸条环卵反应等。
3 讨论
皮内试验的临床意义：①本试验具有较高敏感性。粪检阳性者皮试阳性率95%左右，健康人的假阳性反应为2%～3%。与肺吸虫的交叉反应为7%～15%，儿童有时出现假阴性反应。②本试验一般作为一种普查过筛方法，阳性者再做进一步的检查。③对低年龄组人群进行皮内试验可检查有无新感染，和用以考核防治效果。④临床上对无血吸虫病史的疑似血吸虫患者，可先用皮内试验作为辅助诊断，如皮内试验阳性再考虑进一步确诊。⑤患者治愈后，在较长时间内皮内试验始终保持阳性反应，因此该法不能用于考核疗效。
环卵沉淀试验的临床意义：①患者阳性率平均为97.3%(94.1%～100.0%)，假阳性率平均为3.1%(2.5%～5.6%)，对华支睾吸虫病和丝虫病患者血清有0.5%严重的交叉反应，肺吸虫患者的交叉反应为6.4%。②患者接受有效治疗后，环卵反应强度逐渐下降。在流行区，人群环卵反应阳性率的变化可作为评价治疗效果，但反应阴转需时较长。
间接血凝试验的临床意义：本法敏感性在93%左右，假阳性率约为2%，肺吸虫病患者血清可出现交叉反应，治疗后本法阴转亦较缓慢。
酶联免疫吸附试验的临床意义：粪检虫卵阳性者的检出率为97%～100%，正常人假阳性率为2%～3%。与一般常见寄生虫无明显交叉反应。用本法检测曼氏血吸虫患者时，发现与旋毛虫有明显交叉反应。
检测血吸虫的各种试验成为临床辅助诊断的有效手段，在流行病学调查中尤具重要作用。
[参考文献]
[1]邹安琪,周东伟,江志群,等 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1480KB，2页)。