潞党参多糖的提取及含量测定
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2010年11月5日
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[摘要] 目的：从规范化产区潞党参中提取多糖并测定其多糖的含量。方法：通过水提醇沉法，提取潞党参中的多糖，并用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果：测得潞党参中多糖含量为20.99%，平均回收率为98.43%，RSD=1.03%(n=6)。结论：潞党参中具有较高多糖量，是一种具有开发利用价值的中药材。
[关键词] 潞党参；水提醇沉法；苯酚-硫酸法；多糖
[中图分类号] R943 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721(2010)11(a)-042-02
Extraction and determination of the polysaccharide in radix codonpis pilosulae
LEI Xiaoyi, ZENG Xuehua
(The Longgang Centre Hospital of Longgang District, Shenzhen 518116, China)
[Abstract] Objective: To extract the polysaccharide and measure the polysaccharide content in Radix Codonopsis pilosulae from good agriculture practice (GAP) areas. Methods: Polysaccharide was extracted from Codonopsis with ultrasonic technique, and its content in Codonopsis was determined with phenolsulfuic acid method. Results: The polysaccharide content in Radix Codonopsis pilosulae was 20.99%, the rate of recovery was 98.43%, and RSD was 1.03%(n=6). Conclusion: Codonopsis has higher content of polysaccharide, and it has value of utilization and development.
[Key words] Codonopsis;Water extraction and alcohol precipitation method;Phenol-sulfuic acid method;Polyraccharide
党参(Radix Codonopsis pilosulae)为桔梗科植物党参、素花党参或川党参的干燥根，分布于华东、东北、西北、华北、湖南及西南，是中国传统补药[1]。研究表明，多糖类化合物是多种中草药的有效成分之一，具有调节免疫功能、降血糖血脂、抗衰老等多种疗效，党参多糖具有调节血液系统，抗癌、抗炎、抗病毒等免疫增强作用。作为党参的活性成分，党参多糖可通过测定多糖的含量来鉴别党参质量。为了为党参的质量控制提供科学依据，笔者分别以水提醇沉法提取党参多糖，苯酚-硫酸法测定多糖含量，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 仪器与试剂
材料：秋季挖取山西平顺潞党参，洗净阴干并粉碎，过50目筛，60℃烘3 h，置于燥处备用。
仪器：TU1901紫外可见分光光度计(上海棱谱仪器仪表有限公司)；ZKB-Ⅲ型循环水真空泵(上海伊利仪器制造有限公司)；SK8200H超声仪(上海科岛超声仪有限公司)。
试剂：葡萄糖(天津化学试剂三厂，分析纯)、乙醇(河南虎兴贸易有限公司，分析纯)、苯酚(河南虎兴贸易有限公司，分析纯)、硫酸(河南虎兴贸易有限公司，分析纯)。
1.2 方法
1.2.1潞党参多糖的提取将200 g党参置圆底烧瓶中，加500 ml石油醚，在75℃下回流1 h脱脂并过滤，待溶媒挥发干，然后用纯度80%的500 ml乙醇浸渍过夜，用超声提取2次，每次1 h并过滤。药渣加1 000 ml蒸馏水浸渍1 h后，超声提取30 min再过滤，用蒸馏水500 ml，超声提取30 min，过滤合并滤液，减压浓缩至150 ml，氯仿萃取3次，10 mg/g活性炭脱色2次，抽滤，滤液加950 ml/L乙醇使含量达80%。置冰箱中过夜，滤过残渣先后用950 ml/L乙醇、乙醚、丙酮洗涤即得多糖粗品，用水-乙醇重结晶纯化数次，置60℃下烘干即得纯潞参多糖[2]。
1.2.2 标准曲线的绘制将葡萄糖对照品置于105℃干燥，至恒重，精密称取的100 mg，加适量水溶解转移至容量瓶中，加水至100 ml，摇匀即得浓度为1 mg/ml的标准葡萄糖溶液。取大试管6支，使用移液枪吸取10、20、40、60、80、100 μl的1 mg/ml葡萄糖液，各加蒸馏水至2 ml，并加人苯酚试液1 ml，迅速滴加浓硫酸5 ml，待试管冷却后，沸水浴15 min后取出试管冷却至室温。置于490 nm波长下用TU1901分光光度计测定吸光度。
1.2.3 潞党参多糖的含量测定精确称取前期处理好的潞党参粉末0.2 g，置圆底烧瓶中加800 ml/L乙醇150 ml，置水浴锅中90℃回流提取1 h，残渣用800 ml/L热醇洗涤。将残渣连同滤纸置烧杯中，加150 ml蒸馏水，于90℃热水浴中提取1 h，趁热过滤后残渣及烧瓶洗液并入滤液，置冷后移入250 ml容量瓶中，浓度C为0.8 mg/ml，以蒸馏水定容备用。称取20 mg纯潞党参多糖，置100 ml容量瓶中定容为多糖储备液，得浓度C1，再按标准曲线制作方法测定0.2 m储备液吸光度，最后利用回归方程，求出多糖供试液中的葡萄糖浓度C2。吸取0.2 ml样品溶液，加蒸馏水至2 ml，滴入苯酚试液 1ml，迅速滴加5 ml浓硫酸，冷却后沸水浴加热15 min，取出放入冷水中冷却至室温，于490 nm波长下，用TU1901分光光度计测定吸光度，测得平均吸光度值为0.168，数据带入回归方程，可得样品中葡萄糖浓度C3。
1.2.4 回收率试验称取1 g潞党参，加入精制党参多糖20 mg，再用800 ml/L乙醇回流2 h，待残渣溶剂挥去后，连续用水回流2 h，移至250 ml容量瓶中定容。摇匀后移取1 ml于25 ml容量瓶中，摇匀后精密吸取溶液1 ml，测定其吸光度值。
2 结果
经过测定，葡萄糖对照液吸光度见表1所示。
多糖储备液浓度C1为0.2 mg/ml，利用回归方程，可得多糖供试液中的葡萄糖浓度C2为2.506 μg/ml及样品中葡萄糖浓度C3为2.107 g/ml。可计算得出多糖浓度C4为0.168 mg/ml，多糖含量为20.99%，平均回收率为98.43%，RSD=1.03%(n=6)。
3讨论
党参根椐产地分东党参、西党参及潞党参等商品规格，潞党参为植物党参的栽培品 ......
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