高效液相色谱法测定左旋多巴片的有关物质
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2011年1月15日
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[摘要] 目的：采用高效液相色谱法测定左旋多巴片的有关物质。方法：采用依利特Spherisorb C18柱(5 μm，150×4.6 mm)，以0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(含0.003 mol/L辛烷磺酸钠，pH3.0)-甲醇(84∶16)为流动相，检测波长280 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃。结果：降解产物在该色谱条件下与左旋多巴分离良好。结论：本方法用于测定左旋多巴片有关物质，方法简便，快速，结果准确。
[关键词] 左旋多巴片；高效液相色谱法；有关物质
[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A[文章编号] 1674-4721(2011)01(b)-043-02
Determination of related substances in levodopa tablet by HPLC
ZHAO Lei
(Children's Hospital, Zhejiang University of Medicine, Hangzhou 310003, China)
[Abstract] Objective: To use an RP-HPLC method for determination of related substances in levodopa. Methods: The method was performed on Spherisorb column(5 μm，150×4.6 mm), the mobile phase A was 0.01 mol/L KDP buffer (contain 0.003 mol/L Octane-1-sulfonic acid sodium salt, pH3.0), the mobile phase B was MeOH, the detection wavelength was 280 nm. The flow rate was 1.0 ml/min. Results: The related substances in levodopa were separated successfull. Conclusion: The Method is simple, accurate and good reproducibility.
[Key words] Levodopa tablet; HPLC; Related substances
左旋多巴是目前临床上治疗帕金森疾病最常用和最有效的药物之一，也是目前治疗大龄儿童弱视的主要药物[1]。中国药典10版二部使用TLC法测定左旋多巴原料的有关物质，但未对左旋多巴片的有关物质检查作出相关规定。本文通过主成分自身对照法，采用HPLC对左旋多巴片的有关物质进行了分析[2]，并对该方法进行了方法学验证，为完善标准提供依据。
1 仪器与试药
岛津HPLC仪(配LC-10AT泵，SPD-6AV检测器，SAGE色谱工作站)。左旋多巴对照品及左旋多巴片均由杭州国光药业有限公司提供，左旋多巴片的规格为0.125 g/片，批号为050701、050702、050703。甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液取左旋多巴对照品30 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
2.1.2 供试品溶液取左旋多巴片数片，研细，混匀。取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)，精密称定，置25 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
精密量取供试品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱：依利特Spherisorb C18柱(5 μm，150×4.6 mm)，流动相： 0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(含0.003 mol/L辛烷磺酸钠，pH3.0)-甲醇(84∶16)，检测波长：280 nm，流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，进样量20 μl。理论板数按左旋多巴峰计不低于2000，左旋多巴与其他峰的分离度符合要求。
2.3 专属性试验
取对照品溶液和供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图1。
2.4 采用酸、碱、氧化、强光等方式对左旋多巴片进行破坏，并用HPLC进行有关物质检查
酸破坏：取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)，置25 ml量瓶中，加6 mol/L的 HCl溶液1 ml，摇匀，于室温条件下放置1 h，用6 mol/L的NaOH溶液1 ml中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待测。
碱破坏：取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L的NaOH溶液1 ml，摇匀，放置5 min，用0.1 mol/L的HCl溶液1 ml中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待测。
氧化破坏：取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)2份，置25 ml量瓶中，分别加3%H2O2和30%H2O2溶液各1 ml，摇匀，室温放置3 h，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待测。
光破坏：取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)，置25 ml量瓶中，于紫外灯(254 nm)下照射3 h，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待测。
高温高湿破坏：取本品细粉适量(相当于左旋多巴7.5 mg)，置25 ml量瓶中，加流动相5 ml溶解，置100℃水浴中加热4 h，取出后冷却至室温。加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待测。
分别取上述各种续滤液，按“2.2”项下的色谱条件进样，记录色谱图。破坏后的色谱图见图2。结果表明，样品在酸、碱、重度氧化和高温高湿条件下不稳定，在轻度氧化和光照条件下相对稳定。各降解物质与主成分分离良好[3]。
2.5 检测限
取供试品溶液，经多次稀释，按“2.2”项色谱条件进样分析，最后得S/N＝3。该条件下供试品溶液的浓度为0.3 μg/ml，进样量为20 μl，即检测限为6.0 ng。
2.6 精密度试验
取对照品溶液，连续进样6次 ......
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