流感疫苗生产原料鸡胚消毒方法研究
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[摘要] 目的：探索流感疫苗生产原料鸡胚消毒方法。方法：对接种前鸡胚用酒精消毒，比较其收菌效果、接种后存活率及接种后鸡胚尿囊液的血凝滴度。结果：用75%酒精消毒鸡胚表面120 s，鸡胚表面已无菌、鸡胚存活率最高、不影响鸡胚接种后收获尿囊液的血凝滴度。结论：通过对鸡胚消毒方式的研究，证明用75%的酒精对鸡胚进行消毒的方法可行。
[关键词] 流感；鸡胚；消毒；酒精
[中图分类号] R-332 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721(2011)06(a)-024-02
Influenza vaccine production method of disinfection of raw chicken
WU Shujia
Jiangsu Yanshen Biological Technology Co., Ltd., Jiangsu Province, Changzhou 213000, China
[Abstract] Objective: To explore the raw chicken influenza vaccine production method of disinfection. Methods: Chicken with alcohol disinfection before inoculation to compare the effect of closing strain, the survival rate after inoculation, and allantoic fluid after inoculation, the hemagglutination titer. Results: 75% alcohol disinfection of chicken with the surface of 120 seconds, the surface was sterile chick, chick survival rate did not affect the chick embryo allantoic fluid harvested after inoculation of the hemagglutination titer. Conclusion: The disinfection of chicken embryo research, proved that with 75% alcohol disinfection of chicken embryos is feasible.
[Key words] Influenza; Chicken embryo; Disinfection; Alcohol
流感病毒具有高度的传染性，能引起急性呼吸道疾病，流行特点是在短时间内突然爆发，迅速蔓延，造成不同程度的流行，包括世界大流行、局部流行爆发及扩散。接种流感疫苗是公认的预防流感发生和传播的最佳方法[1-5]。用鸡胚作为流感病毒生长介质是目前流感疫苗生产最常用的培养基质。鸡胚的消毒方法也是控制流感疫苗生产质量的重点。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物及试剂9～11日龄海兰白鸡胚，由宁波威达龙禽业有限公司购进；NaCl由江苏勤奋药业有限公司购进；酒精由江苏永丰化学试剂厂购进。
1.1.2毒种3个流感毒种来自NIBSC，具有完整的历史和质量背景资料。即H1N1 A/California/7/2009(H1N1)(简称A1)，H3N2 A/Perth/16/2009(H3N2)(简称A3)和B B/Brisbane/60/2008(简称B)。
1.2 方法
1.2.1 鸡胚消毒后收菌将一定数量9～11日龄的海兰白鸡胚， 用75%酒精喷洒2遍，消毒一定时间后，用肉汤琼脂培养皿收菌。在30~35℃的条件下培养48 h后计数。
1.2.2 消毒后鸡胚接种后污染率用A1、A3、B三型流感病毒分别接种于已消毒的9～11日龄鸡胚尿囊腔32～36℃培养48～80 h[6]，记录鸡胚存活情况；无菌收取经过病毒培养的鸡胚尿囊液，直接血凝法测定。
2 结果
2.1 用75%酒精消毒后各时间段鸡胚表面菌落数
用75%酒精消毒鸡胚表面120 s，鸡胚表面已无菌。见表1。
2.2鸡胚接种后存活率
用75%的酒精消毒30、60、90、120 s后鸡胚，分别接种3型流感病毒后，消毒120 s鸡胚存活率最高。见图1。
2.3消毒不同时间鸡胚接种后收获尿囊液的血凝滴度
用75%酒精消毒鸡胚的时间长短不会影响鸡胚接种后收获尿囊液血凝滴度。见表2。
3讨论
通过对生产流感疫苗的原料海兰白鸡胚消毒方式的研究，证明用75%酒精对鸡胚进行消毒的方法可行。消毒后鸡胚的无菌及接种后鸡胚的血凝滴度均符合生产流感疫苗质量要求。从鸡胚消毒不同时间收菌结果来看，用75%酒精消毒鸡胚表面120 s，消毒效果最好。从对消毒后接种病毒的鸡胚存活率来看，用75%酒精消毒30、60、90、120 s后鸡胚 ......
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