间接竞争酶联免疫吸附法检测骨肽的研究(2)
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图4 显色时间的确定
2.3.6 标准曲线的绘制 以无检测抗原抑制时的A均值为B0值，相应浓度检测抗原抑制时的A均值为B值，以抑制率B/B0为纵坐标(Y)，以不同检测抗原浓度的对数为横坐标(X)，绘制标准曲线，线性回归方程为Y=-0.017X-0.344 5，r=0.999 6。建立的间接竞争ELISA检测骨肽的方法，ic50=1.89 ng/ml，最低检测限为0.08 μg/ml，线性范围为0.002 5～0.01 g/ml。
2.3.7 精确度测定 本试验以孔间差异和板间差异来表示该方法的精确度。结果见表2。差异系数总体变化趋势是随浓度的稀释而增大，且板间差异程度大于板内差异程度。
表2 ELISA标准曲线的孔间差异和板间差异(μg/ml)
3 讨论
经文献资料查阅，未见有关ELISA法检测骨肽方面的报道。为有效控制骨肽注射液的质量，我们对其进行测定，用于对该药的质量控制。本研究通过考察抗原浓度、竞争时间、二抗浓度、工作时间、显色时间等对间接竞争酶联免疫吸附结果的影响，实验结果表明，检测抗原浓度为 0.25 μg/ml，抗血清稀释度为300倍，竞争时间30 min，酶标二抗的最佳工作浓度为1∶400，二抗反应时间40 min，显色时间为15 min，总体上试验精确度较好。
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(收稿日期：2011-08-29)
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