高糖对豚鼠膀胱ICCs细胞电生理的影响(1)
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[摘要] 目的 观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal，ICCs)内钙离子荧光的改变，探讨糖尿病膀胱(diabetic cystopathy，DCP)的发病机制。 方法 采用酶消化法原代培养, 激光共聚焦技术观察5、10、15 mmol/L葡萄糖浓度下培养24、72 h的ICCs，扫描记录每个时间点胞内的钙离子荧光强度值。结果 糖浓度增高培养时间延长，ICCs内钙离子荧光值升高(P ＝ 0.00)，只有15 mmol/L的24 h组降低(P ＝ 0.00)。 结论 高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学造成显著影响，这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一。
[关键词] Cajal间质细胞；高糖环境；钙离子；糖尿病膀胱
[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)02(b)-0017-02
Effect of high glucose on guinea pig bladder ICCs intracellular electrophysiology
FAN Yonghong
Department of Urology, the First People's Hospital of Pingdingshan City in He′nan Province, Pingdingshan 467000, China
[Abstract] Objective To observe a high glucose environment in guinea pig bladder of interstitial cells of Cajal (interstitial cells of Cajal, ICCs) Ca2+, in order to explore the fluorescence changes of diabetic bladder (diabetic, cystopathy, DCP) in the pathogenesis. Methods Primary culture ICCs bladder cells with collagenase digestion in vitro. Observed ICCs at different concentrations 5, 10, 15 mmol/L in 24, 72 hours times, by confocal laser scanning technology and got the calcium fluorescence titer. Results Glucose concentration increased the duration of culture, ICCs Ca2+ fluorescence values increased (P = 0.00), only 15 mmol/L in 24 hours decreased (P = 0.00). Conclusion High glucose environment on guinea pig bladder ICCs electrophysiology have a significant impact, such alterations may be one of the important reasons causing the onset of DCP.
[Key words] Cajal interstitial cells; High glucose environment; Calcium ion; Diabetic bladder
作为膀胱慢波活动的起搏器和传导者，ICCs在去除其调控和影响因素的干扰后，仍然可以发生自发性兴奋和收缩[1]。因此推测，ICCs功能的改变可能是DCP发病原因之一。而离体的Cajal间质细胞在高糖环境下变化的研究尚未见报道。本研究通过单细胞培养、荧光负载的方法来观察高糖环境对 ICCs细胞内钙信号的影响，以探索DCP发病的细胞学机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
健康豚鼠(新疆实验动物中心)。激光共聚焦显微镜META 510，Zeiss，胶原酶V，钙离子荧光剂Fluo-4(AM(Molecular Probes 公司)。
1.2 方法
1.2.1 单细胞培养豚鼠膀胱ICCs细胞 脱臼处死豚鼠，无菌手术取出豚鼠膀胱，取肌层并剪成碎块，胶原酶Ⅴ消化后以无糖型DMEM混合，接种于专用的共聚焦培养皿中，普通培养箱中培养，于培养24 h后再分别以含葡萄糖5、10、15 mmol/L的细胞培养液继续分别培养24、72 h。
1.2.2 荧光液的配制 取Fluo-4AM原液制成5 μmol/L的工作液。取共聚焦显培养皿中ICCs洗涤后，加入Fluo-4AM工作液孵育40 min后取出 ......
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