依达拉奉预给药对油酸致急性肺损伤大鼠的作用及机制(2)
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2011年9～11月，取雄性SD大鼠30只，体重200～250 g，由山西医科大学动物实验中心提供。随机分为3组(n = 10)：对照组(A组)腹腔注射10 mL/kg的0.9%氯化钠注射液后，鼠尾静脉注射0.9%氯化钠注射液0.1 mL/kg；ALI组(B组)腹腔注射10 mL/kg的0.9%氯化钠注射液后，静脉注射油酸0.1 mL/kg制备ALI模型[3]；依达拉奉组(C组)腹腔注射10 mL/kg的依达拉奉后同B组方法建立ALI模型。油酸(批号：75090)购于美国SIGMA公司，依达拉奉(批号：H20051992)购于吉林博大制药公司。TNF-α(批号：EK-0526)、NO(批号：EM-1360)、MDA(批号：ER-1264)、SOD(批号：ER-1265)、ELISA试剂盒均购于北京博奥森公司。
1.2 实验方法
1.2.1 动脉血氧分压PO2测定 造模完成后6 h处死大鼠，抽取腹主动脉血液1 mL，行血气分析测定PO2。
1.2.2 大鼠肺组织湿/干重比(W/D)测定 分离右肺中叶，用滤纸吸尽表面附着血迹，分析天平称量湿重。放入80℃恒温箱烤48 h至恒重，然后称量干重，计算肺组织湿/干重比(W/D)。
1.2.3 血浆TNF-α、NO、MDA水平测定 处死大鼠，抽取腹主动脉血液5～6 mL，离心(3 000 r/min，5 min)后取上清液，置-70℃保存。用ELISA法测定TNF-α、NO、MDA的含量。
1.2.4 肺组织SOD测定 取右肺下叶，称取0.1 g肺组织加入1 mL PBS后，用电动匀浆器匀浆。室温离心(2 000 r/min，10 s)后，4℃低温离心(3 000 r/min，5 min)，离心后取上清液，置-70℃保存。用ELISA法测定SOD的含量。
1.3 统计学分析
实验结果均以x±s表示，经SPSS 17.0软件处理，组间差异采用非参数检验，两两比较采用Bonferroni法，检验水准P < 0.05。
2 结果
与A组相比，B、C组大鼠腹主动脉血PO2、肺组织SOD含量均低于A组，差异有统计学意义(P < 0.05)。C组PO2、SOD低于A组，但是其降低的幅度小于B组，与B组相比，C组PO2、SOD高，且差异有统计学意义(P < 0.05)。A组W/D、TNF-α、NO、MDA的含量均低于B、C组；B组W/D、TNF-α、NO、MDA的含量均增加明显，与A组比较，差异有统计学意义(P < 0.05)；C组W/D、TNF-α、NO、MDA的含量增加幅度小，与B组比较，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表1、2。
3 讨论
急性肺损伤时中性粒细胞在肺内聚集，血管内皮细胞受损，进而释放多种炎症介质及氧自由基、蛋白酶，对肺组织进行破坏[4]。自由基通过脂质过氧化、DNA损伤、蛋白质损伤等途径，破坏肺组织，加重肺组织的损伤程度。自由基清除剂分为非酶类清除剂和酶类清除剂。非酶类清除剂主要有维生素E、维生素C、β-胡萝卜素、微量元素硒等。酶类清除剂主要有超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶等。依达拉奉作为自由基清除剂，常用于对脑梗死患者的治疗。
多项实验研究表明[5-6]，大鼠鼠尾静脉注射0.1 mL/kg油酸可以建立ALI大鼠模型。B组大鼠呼吸急促，且PO2及W/D均较A组低，表明本研究成功复制ALI模型。B、C组大鼠在成功建立模型后，进行不同的干预措施。C组大鼠腹腔注射10 mL/kg依达拉奉，进行干预实验。C组大鼠PO2及W/D均较A组低，但明显高于B组，差异有统计学意义；C组大鼠SOD值高于B组，NO及MDA低于B组，差异均有统计学意义；C组大鼠炎性因子TNF-α低于B组，差异有统计学意义。研究结果表示，依达拉奉组大鼠自由基及炎性因子低于B组，减轻了肺组织损伤程度，说明依达拉奉能减少鼠尾静脉注射油酸引起的ALI模型大鼠肺损伤程度，但是未能明显降低急性肺损伤的发生率。ALI的病因复杂多样，许多危重疾病均有可能发展成为高死亡率的ALI或ARDS，在这些危重疾病的早期，或者在ALI发生的早期，如果没有依达拉奉的禁忌证，注射依达拉奉可以保护肺组织[7-8]。
综上所述，预先注射依达拉奉可减轻油酸诱导的大鼠急性肺损伤程度，其机制可能与清除氧自由基和抑制炎性因子释放有关。
[参考文献]
[1] Rubenfeld GD，Caldwell E，Peabody E，et al. Incidence and outcomes of acute lung injury[J]. N Engl J Med，2005，353：1685-1693.
[2] Michael A，Rachel L. The acute respiratory distress syndrome：pathogenesis and treatment[J]. Annu Rev Pathol ......
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