HPLC法测定祛湿化瘀口服液中芍药苷的含量
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[摘要] 目的 建立祛湿化瘀口服液中芍药苷的HPLC含量测定方法。 方法 采用Agilent Eclipse Plus—C18色谱柱(4.6×150 mm)，流动相：乙腈—0.1%磷酸(14∶86)；柱温：30℃；流速：0.6 mL/min；检测波长：230 nm。 结果 芍药苷在0.48～9.12 μg范围内线性关系良好(r = 0.999 9)，平均回收率为98.93%，RSD = 0.34%(n = 6)。 结论 本法简便快捷、准确可靠、重复性好，可用于测定祛湿化瘀口服液中芍药苷的含量。
[关键词] 祛湿化瘀口服液；HPLC；含量测定；芍药苷
[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674—4721(2012)09(a)—0063—02
祛湿化瘀口服液是由丹参、赤芍、香附、乳香、没药、益母草等多味药材加工制成的医院制剂，有消炎止痛、活血化瘀之功效，用于湿热瘀阻所致的慢性盆腔炎、输卵软管阻塞，症见带下、少腹及腰骶疼痛等。经过多年临床经验证明，祛湿化瘀口服液质量稳定，疗效可靠。为了更好的控制该制剂的质量，确保人体用药安全，经查阅有关资料及多次试验，本文所述方法测定芍药苷含量，取得了满意的效果，可以有效的控制该制剂的质量。报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津AUW220D电子分析天平(日本岛津公司)， DSQ10260超声仪(上海特惠电子仪器有限公司)，Agilent 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。
1.2 试药
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736—201035)；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。祛湿化瘀口服液(批号：111202、111216、111228)由民权县人民医院提供。
2 方法与结果
2.1 供检测溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品约12.00 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇振摇使完全溶解后，再加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液作为芍药苷对照品溶液。
2.1.2 样品溶液的制备 精密量取祛湿化瘀口服液3 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液作为样品溶液。
2.1.3 阴性样品溶液的制备 取处方中的药材用量，除去赤芍，按照生产工艺制成阴性制剂，按照供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液，供试验用。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
依据中华人民共和国药典中关于芍药苷的含量测定方法[1]96—97。色谱柱：选用Agilengt Eclipse Plus—C18色谱柱(4.6×150 mm)；流动相：乙腈—0.1%磷酸(14∶86)；流速：0.6 mL/min；进样量：10 μL；检测波长：230 nm；理论板数按芍药苷峰计算不低于3 000。芍药苷与相邻峰的分离度大于1.5，峰型对称。
取样品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液按上述条件测定，结果证明，样品芍药苷的分离度良好，理论板数高于3 000，阴性对照无干扰。见图1。
2.3 线性关系考察
取上述对照品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件，分别进样1、3、5、7、9、11、13、15、17、19 μL，检测芍药苷峰面积，以芍药苷峰面积为纵坐标(Y)，以进样量为横坐标(X)，计算线性回归方程：Y = 235.056 74X+12.520 03，相关系数r = 0.999 9。实验结果表明，芍药苷在0.48～9.12 μg检测范围内线性关系良好。
2.4 重复性试验
取同一批样品9份，按供试品溶液的制备方法制备样品溶液，进样10 μL测定芍药苷的含量，结果RSD = 1.2%(n = 9)。
2.5 精密度试验
取上述芍药苷对照品溶液，重复进样6次，每次10 μL，检测芍药苷峰面积，结果6次峰面积的RSD = 0.52%(n = 6)，表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一份样品溶液，在不同的时间点：0、2、4、8、12、16、24 h进样测定芍药苷的峰面积，结果RSD = 0.48%，样品溶液在24 h内峰面积稳定。见表1。
2.7 加样回收率试验
精密量取6份已知含量为13.544 mg/mL的样品溶液，分别置1～6号50 mL容瓶中，另取芍药苷120 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，分别精密加入对照品储备液3 mL于1～6号容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。用Agilengt Eclipse Plus—C18色谱柱(4.6×150 mm)，流动相：乙腈—0.1%磷酸(14∶86)为流动相；流速0.6 mL/min；进样量10 μL；检测波长230 nm；分别测定，结果见表2。
2.8 样品含量测定
取3批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，各进样10 μL，按外标法计算芍药苷的含量，结果见表3。
3 讨论
3.1 处方分析
祛湿化瘀口服液是由丹参、赤芍、香附、乳香、没药、益母草等多味药材加工制成的医院制剂，方中赤芍味苦，性微寒，归肝经，具有清热凉血、散瘀止痛的功能，为主药之一，芍药苷为其主要成分，故本文以芍药苷为指标进行测定，控制本品质量，在样品测定时，芍药苷与其他组分均能达到基线分离，而缺赤芍的阴性对照，无干扰，结果满意。
3.2 提取溶剂的选择
有文献报道以稀乙醇为提取溶剂[1]147—148[2—3]，经过比较发现，以甲醇为溶剂测定所得的芍药苷含量较高，故以甲醇为提取溶剂进行试验。
3.3 检测波长的选择
通过紫外扫描发现，芍药苷在230 nm处有最大吸收，故选择230 nm为测定波长。
3.4 流动相选择
参考文献[4—8]，比较不同的流动相，在选择流动相时，本文曾用乙腈—0.05%磷酸水(14∶86)作流动相，结果峰形不理想；用水—甲醇—乙腈(76∶10∶10)作流动相，芍药苷色谱峰出现不对称。经过多次实验 ......
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