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编号:12328721
以红曲为原料保健食品中洛伐他汀的含量测定(1)
http://www.100md.com 2012年10月15日 张树丹 李海涛
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    参见附件。

     [摘要] 目的 建立以红曲为原料的保健食品中总洛伐他汀含量测定的方法。 方法 用高效液相色谱法一次测定保健食品中两种结构形式洛伐他汀的总含量,色谱条件为:色谱柱(zorbax C18,4.6×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(385∶115∶0.14);检测波长:238 nm;流速:1.0 mL/min。 结果 洛伐他汀在2.0~300 μg/mL范围内线性关系良好,r = 0.999 9;平均回收率为99.5%,RSD为0.57%(n = 9)。 结论 该高效液相色谱法简单、灵敏、快速、准确,适用于以红曲为原料的保健食品中总洛伐他汀的含量测定。

    [关键词] 红曲;洛伐他汀;保健食品;高效液相色谱法

    [中图分类号] R155.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)10(b)-0005-03

    红曲古称丹曲,最早发现于中国,已有一千多年的生产、应用历史,为红曲霉属真菌接种于蒸熟的大米上发酵而成的一种紫红色米曲,是纯天然的药食两种物质,被广泛用作食品着色剂、调味剂、红腐乳制造原料、肉类保存剂和药物。红曲具有较好的降血脂[1-3]、降血压[4-5]作用,近年来成为保健食品的常用原料,其功效成分为洛伐他汀[6]。

    国食药监许[2010]2号文件要求以红曲为原料的保健食品中的总洛伐他汀推荐量每日暂定不超过10 mg。因红曲中洛伐他汀常以内酯(闭环)和酸式(开环)两种形式同时存在[7],而且在生产过程中温度不同,其比例有所不同,在检测过程中溶液的pH值和贮存时间对其比例也有明显的影响,此外洛伐他汀在体内以开环型与HMG-COA还原酶结合发挥药效,而内酯型洛伐他汀可在体内水解转化为开环型发挥药效,因而仅仅测定和控制产品中内酯型或开环型洛伐他汀成分不足以有效保证含红曲类产品的质量,为保证产品安全[8],本文报道了含红曲保健食品中总洛伐他汀的含量测定方法和条件。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    Agilent 1260液相色谱仪-泵(安捷伦);Agilent 1260DAD检测器(安捷伦);Agilent B.04.02化学工作站(安捷伦);KQ3200DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);QL-901涡旋混匀器(海门其林贝尔仪器制造有限公司);DT5-1离心机(北京时代北利有限公司)。

    1.2 试剂

    甲醇(色谱纯)(批号:1540607023,Merck KGaA);无水乙醇(分析纯)(批号:20110808,天津天新精细化工开发中心);磷酸(分析纯)(批号:20110218,沈阳市联邦试剂厂);氢氧化钠(分析纯)(批号:0411181,沈阳市制剂五厂);洛伐他汀对照品(100600-200502,中国药品生物制品检定所)。

    1.3 保健食品

    珍奥 红曲茶多酚胶囊(珍奥集团股份有限公司,255 mg/粒,批号:S20110501,S20110502,S20110503)。

    2 方法

    2.1 色谱条件与系统适用性试验

    色谱柱:安捷伦zorbax C18柱(4.6×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(385∶115∶0.14);检测波长:238 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:20 μL;分离度大于1.5;理论塔板数按洛伐他汀峰计算应不低于3 000。

    2.2 标准溶液制备

    洛伐他汀标准储备液:准确称量洛伐他汀(内酯)标准品0.040 0 g,加入检测用流动相并定容至100 mL。此溶液浓度为0.4 mg/mL。

    洛伐他汀标准工作液:将洛伐他汀标准储备液用流动相稀释10倍。此溶液浓度为0.04 mg/mL。

    定性用酸式(开环)洛伐他汀对照液:称取洛伐他汀(内酯)标准品4 mg,以0.2 mol/L氢氧化钠溶液定容至100 mL,在50℃条件下超声转化1 h,自然冷却至室温后静置1 h。

    2.3 样品溶液制备

    精密称取0.5 g珍奥红曲茶多酚胶囊内容物于50 mL试管中,加入pH = 3的磷酸溶液10 mL。超声提取30 min,再加入10.0 mL三氯甲烷,涡旋3 min。静置将其以3 000 rpm/min离心3 min。准确吸取三氯甲烷液1 mL至试管中,氮气吹干溶剂。向试管中加入流动相溶解并定容至5 mL,混匀后经0.45 μm滤膜过滤后待进样。

    2.4 测定方法

    分别量取20 μL洛伐他汀标准工作液、酸式洛伐他汀对照液及样品溶液注入色谱仪中,利用被测组分与标准溶液的保留时间定性,利用被测组分内酯及酸式洛伐他汀峰面积之和与标准工作液中内酯型洛伐他汀的峰面积之比进行定量。

    3 结果

    3.1 样品溶液中洛伐他汀内酯结构和酸式结构的定性

    分别量取20 μL样品溶液、洛伐他汀标准工作液及酸式洛伐他汀对照液注入色谱仪中,样品在14.81 min和17 ......

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