KSHVRTA上调宿主细胞Bcl—2表达的分子机制研究(2)
1.5 RT-PCRTRIzol(Invitrogen)法抽提细胞总RNA，用高容量RNA-to-cDNA试剂盒(Applied Biosystems)逆转录合成cDNA。使用SYBR green实时PCR试剂盒(Applied Biosystems)进行PCR扩增，Bcl-2和GAPDH的引物见表1。10 μL反应体系含5 μL Master Mix，5 μm的引物1 μL，4 μL稀释的cDNA。反应条件为：95℃变性5 min后95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，30个循环。每个样品重复3次。数据采集与分析使用StepOnePlus 实时PCR系统(Applied Biosystems)。
1.6 荧光素酶报告基因试验
107个HEK 293细胞、DG75细胞共转染10 μg荧光素酶报告质粒和0、5、10、15、20 μg RTA表达质粒。转染后24 h收获细胞，制备细胞裂解液。向40 μL细胞裂解液中加入25 μL荧光素酶试验底物，使用LmaxⅡ384荧光光度计(Molecular Devices)检测荧光水平 ......
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