HPLC法测定珍杞降糖胶囊中绿原酸的含量(1)
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[摘要] 目的 建立珍杞降糖胶囊中绿原酸的HPLC含量测定方法。 方法 采用HPLC法，色谱柱为Agilengt Eclipse Plus C18 柱(4.6 mm×100 mm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸(17︰83)；流速：0.6 mL/min；检测波长：327 nm。 结果 绿原酸在0.043 3～0.693 8 μg范围内线性关系良好(r = 0.999 9)，平均加样回收率为98.39%，RSD = 0.58%(n = 6)。 结论 本方法简便快速、结果准确，可较好地控制该制剂的质量。
[关键词] 珍杞降糖胶囊；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(a)-0061-03
珍杞降糖胶囊为医院制剂，经过多年临床经验证明，其质量稳定，疗效可靠；由黄芪、玉竹、女贞子、金银花、珍珠母、赤芍、生地、郁金等9味中药材加工制成，具有益气养阴、生津止渴、凉血润燥之功效，主治阳虚燥热型消渴病。绿原酸为金银花的主要有效成分，绿原酸具有抗菌、消炎、止血的功效，对珍杞降糖胶囊疗效的发挥起重要作用。现行质量标准中只有定性检查项目，而没有定量检测指标，本文采用HPLC测定了金银花中绿原酸的含量，方法简便、快捷、准确，回收率高，可较好地控制该制剂的质量。现报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilengt 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，AUW-220D电子分析天平(日本岛津公司)，DSQ10260超声仪(上海特惠电子仪器有限公司)。
1.2 试药
绿原酸对照品(来源：中国药品生物制品检定所；批号：110753-200212)；水为杭州娃哈哈饮用纯净水，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。珍杞降糖胶囊(生产单位：市中医院；批号：110328、110507、110713)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm)；0.4%磷酸-乙腈(83︰17)为流动相；检测波长为327 nm；柱温：30℃；流速为0.6 mL/min；进样量为10 μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1 000[1]。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品约10 mg，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇30 mL，超声5 min使溶解，并定量稀释制成每1毫升中含绿原酸0.2 mg的溶液，作为对照品储备液(10℃以下保存)。精密量取上述储备液5 mL置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品内容物约6.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，、称定重量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)30 min，放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色容量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备
精密称取不含金银花的其他各味中药材约6.0 g，研碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阴性对照溶液。
2.5 标准曲线的制备
取绿原酸对照品溶液(浓度为40 μg/mL)，按“2.1”项下色谱条件分别精密进样1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 μL，记录绿原酸色谱峰的面积值，以色谱峰峰面积为Y，以对照品进样量为X，计算回归方程：Y = 5 442.127 16X-33.940 86，r = 0.999 9。结果显示，在0.043 3～0.693 8 μg范围内绿原酸进样量与峰面积值呈良好的线性关系。
2.6 阴性干扰试验
按“2.1”项下色谱条件分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果绿原酸在4.054 nm波长处有最大吸收，理论板数在4 000以上，绿原酸峰与其他组分峰基线分离(R > 1.5)，阴性样品溶液在绿原酸峰相应位置上对测定无干扰，见图1。
2.7 稳定性试验
按“2.1”项下色谱条件下，取绿原酸对照品溶液(浓度为40 μg/mL)，每隔1小时进样1次 ......
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