当前位置: 首页 > 期刊 > 《中国当代医药》 > 2012年第35期 > 正文
编号:12347799
抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定
http://www.100md.com 2012年12月15日 李志广等
第1页

    参见附件。

    李志广 张现伟 蒋小梅 旷兴林 魏大鹏 章崇杰 四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室;

    【摘要】目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,WesternBlot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1:102400,抗体亲和常数为1.558×109L/mol,WesternBlotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。结论成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。

    【关键词】 细胞分裂周期蛋白激酶 单克隆抗体 DNA复制 制备 鉴定

    【基金】四川大学青年科学基金资助项目(2009SCU11144)

    【分类号】R392

    细胞分裂周期蛋白激酶7(CDC7)是促进DNA合成的重要激酶,在真核生物中,CDC7由574个氨基酸组成并且稳定表达。分子量约64KDa,主要位于细胞核。CDC7激酶在细胞周期的G1期末启动DNA的合成,并且促进细胞由G1期进入S期[1]。CDC7与Dbf4结合成复合物,发挥其激酶活性。Dbf4是一个周期
------
     [摘要] 目的 制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。 方法 以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,Western Blot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。 结果 筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1∶102 400,抗体亲和常数为1.558×109 L/mol,Western Blotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。 结论 成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。

    [关键词] 细胞分裂周期蛋白激酶7;单克隆抗体;DNA复制;制备;鉴定

    [中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(b)-0013-03

您现在查看是摘要介绍页,详见PDF附件(2665kb)