骨髓间充质干细胞对脓毒症急性肺损伤大鼠肺内NF-κB影响的研究(2)
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[Key words] Lung injury;Bone marrow mesenchymal stem cells;Sepsis;NF-κB;MIP-2
脓毒症急性肺损伤是ICU常见危重症，如病情恶化很快发展为急性呼吸窘迫综合征，病死率极高，一直是临床治疗的难点[1-2]。肺损伤时大量炎症细胞在肺内浸润、聚集，多种炎症介质、细胞因子在肺内表达增强，抗炎、促炎平衡失调是导致肺损伤的关键因素[3-4]。最近研究表明，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)可通过再生修复、免疫调节、抗氧化、抗凋亡等减轻急性肺损伤炎症反应，是一种极具吸引性的新的治疗方案[5]。本文采用盲肠结扎穿孔术复制大鼠急性肺损伤模型，通过股静脉注射BMSCs，注射后6 h评价肺损伤病理改变、细胞促炎和抗炎因子变化及肺组织NF-κB活性，探讨BMSCs在脓毒症大鼠急性肺损伤中的肺保护作用及可能机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物及分组雄性Wistar大鼠6只(3～4周)，制备BMSCs。雄性Wistar大鼠36只(150～175 g)随机分为3组，假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和骨髓间充质干细胞治疗组(BMSCs组)，每组12只。实验大鼠由山西医科大学生理实验室动物中心提供。
1.1.2 主要试剂大鼠MIP-2、IL-10 ELISA试剂盒：北京四柏生物科技有限公司；胎牛血清、胰蛋白酶、低糖DMEM、双抗、胞核胞浆蛋白提取试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、荧光曝光Superstar ECL Plus、辣根过氧化酶羊抗兔二抗：杭州四季青生物工程材料有限公司；TBP pAb兔源多抗核内参(43 kD)、NF-κB P65兔源多抗一抗：Bioworld公司。
1.2 实验方法
1.2.1 BMSCs提取及鉴定雄性3周左右Wistar大鼠1只 ......
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