子宫内膜异位症中HIF—1α和VEGF的表达及临床意义(1)
[摘要] 目的 探讨子宫内膜异位症患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达及相关性，两者在子宫内膜异位症发生、发展中的意义。 方法 采用免疫组织化学ElivisionTM二步法分别检测30例子宫内膜异位症(实验组)异位内膜和在位内膜，以及30例正常子宫内膜(对照组)中HIF-1α和VEGF的表达，并对两者表达的相关性进行分析。 结果 HIF-1α在子宫内膜异位症患者异位及在位内膜中的表达水平均强于正常子宫内膜，差异有统计学意义(P<0.05)，且在异位内膜中的表达水平强于在位内膜，差异有统计学意义(P<0.05)；VEGF在子宫内膜异位症患者异位及在位子宫内膜中的表达强于正常子宫内膜，差异有统计学意义(P<0.05)，且在异位内膜中的表达强于在位内膜，差异有统计学意义(P<0.05)；各组中的增生期和分泌期表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 HIF-1α与VEGF在子宫内膜异位症患者异位内膜中的表达增高，且呈正相关。HIF-1α可能通过VEGF在子宫内膜异位症的发生、发展中发挥作用。
[关键词] 子宫内膜异位症；缺氧诱导因子-1α；血管内皮生长因子；免疫组织化学
[中图分类号] R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)12(b)-0017-04
子宫内膜异位症是育龄期妇女的常见病、多发病，近年来其发病率呈明显上升趋势[1]，已成为严重影响妇女身心健康与生育功能的难以治愈的疾病。尽管子宫内膜异位症是良性疾病，但它却有着恶性肿瘤类似的生物学特性，诸如侵袭、种植，甚至很可能远处转移。近年来国内外的研究发现，新生血管的生成是子宫内膜异位症发病过程中的关键一环。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能够特异性地作用在血管内皮细胞上，是众多促血管生成因子中最重要的一个[2]，不仅能促使新生血管的生成，而且在子宫内膜异位症发生、发展中发挥着非常重要的作用[3]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是一种关键性的调控因子，它介导了细胞对缺氧微环境适应的反应，并在肿瘤侵袭过程中形成新生血管的环节上发挥着重要的作用。本研究旨在探讨HIF-1α、VEGF与子宫内膜异位症发生、发展的关系，并探讨其如何发挥作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究对象来源于南昌大学第四附属医院妇产科2011年1月～2014年1月的手术病例。实验组为子宫内膜异位症患者30例，术后经病理证实，获取异位病灶及子宫内膜，其中增生期20例，分泌期10例，平均年龄(44.07±7.49)岁；对照组为因子宫肌瘤行子宫切除、盆腔结构正常的患者30例，获取子宫内膜，其中增生期18例，分泌期12例，平均年龄(46.10±5.19)岁。所选病例术前3个月内未应用过激素类药物，未接受放疗、化疗及手术治疗，均无其他免疫疾病、急性炎症及其他肿瘤病史。所取的组织标本全部经病理学确诊，月经周期按第8版《妇产科学》教材，经HE染色后分为增生期及分泌期。
1.2 主要试剂
鼠抗人VEGF单克隆抗体(即用型)、免疫组织化学ElivisionTM试剂盒、DAB染色试剂盒、磷酸盐缓冲液(PBS)均购自福州迈新生物技术有限公司。兔抗人HIF-1α多克隆抗体为浓缩剂，购自武汉博士德生物工程有限公司；试验时稀释浓度为1∶50。
1.3 方法
所有标本均由10%甲醛固定、石蜡包埋，连续3 μm切片，采用免疫组织化学ElivisionTM二步法非生物素检测系统，已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照，DAB显色。实验操作严格按照说明书进行。
1.4 结果判断
HIF-1α的蛋白阳性信号主要表达在腺上皮细胞胞质内，显微镜下可见呈棕黄色颗粒。VEGF蛋白阳性主要表达在内膜细胞胞质内和血管内皮细胞胞质内。HIF-1α和VEGF蛋白表达的判定均参照Birner等[4]半定量测定的方法，据高倍镜下综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行判定。着色弱但明显强于阴性对照者为1分，染色清晰者为2分，染色强者为3分；阳性细胞占总细胞数的判定：10%～50%为2分，51%～80%为3分，>80%为4分。以上两项评分相加，阳性细胞<10%为(-)，3分为弱阳性(+)，4～5分为阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)。
1.5 统计学方法
应用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用精确概率法以及χ2检验，等级资料采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HIF-1α的表达
HIF-1α蛋白在子宫内膜异位症异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的阳性表达率分别为80.00%(24/30)、53.33%(16/30)、0(0/30)，差异有统计学意义(χ2=40.320，P<0.01)。在异位内膜中的表达高于在位内膜(χ2=4.8，P<0.05)；在异位和在位内膜中的表达高于正常子宫内膜(χ2=21.818，P<0.01)。异位和在位内膜以及正常子宫内膜中增生期和分泌期的表达差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。
表1 HIF-1α的表达(n)
2.2 VEGF的表达
VEGF蛋白在子宫内膜异位症异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的阳性表达率分别为83.33%(25/30)、60.00%(18/30)、6.67%(2/30)，差异有统计学意义(χ2=37.067，P<0.01)。在异位内膜中的表达高于在位内膜(χ2=4.022，P<0.05)；在异位和在位内膜中的表达高于正常子宫内膜(χ2=19.100，P<0.01)。异位和在位内膜以及正常子宫内膜中增生期和分泌期的表达差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。 (戴星 周静 胡鸣 孙玉芳)
[关键词] 子宫内膜异位症；缺氧诱导因子-1α；血管内皮生长因子；免疫组织化学
[中图分类号] R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)12(b)-0017-04
子宫内膜异位症是育龄期妇女的常见病、多发病，近年来其发病率呈明显上升趋势[1]，已成为严重影响妇女身心健康与生育功能的难以治愈的疾病。尽管子宫内膜异位症是良性疾病，但它却有着恶性肿瘤类似的生物学特性，诸如侵袭、种植，甚至很可能远处转移。近年来国内外的研究发现，新生血管的生成是子宫内膜异位症发病过程中的关键一环。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能够特异性地作用在血管内皮细胞上，是众多促血管生成因子中最重要的一个[2]，不仅能促使新生血管的生成，而且在子宫内膜异位症发生、发展中发挥着非常重要的作用[3]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是一种关键性的调控因子，它介导了细胞对缺氧微环境适应的反应，并在肿瘤侵袭过程中形成新生血管的环节上发挥着重要的作用。本研究旨在探讨HIF-1α、VEGF与子宫内膜异位症发生、发展的关系，并探讨其如何发挥作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究对象来源于南昌大学第四附属医院妇产科2011年1月～2014年1月的手术病例。实验组为子宫内膜异位症患者30例，术后经病理证实，获取异位病灶及子宫内膜，其中增生期20例，分泌期10例，平均年龄(44.07±7.49)岁；对照组为因子宫肌瘤行子宫切除、盆腔结构正常的患者30例，获取子宫内膜，其中增生期18例，分泌期12例，平均年龄(46.10±5.19)岁。所选病例术前3个月内未应用过激素类药物，未接受放疗、化疗及手术治疗，均无其他免疫疾病、急性炎症及其他肿瘤病史。所取的组织标本全部经病理学确诊，月经周期按第8版《妇产科学》教材，经HE染色后分为增生期及分泌期。
1.2 主要试剂
鼠抗人VEGF单克隆抗体(即用型)、免疫组织化学ElivisionTM试剂盒、DAB染色试剂盒、磷酸盐缓冲液(PBS)均购自福州迈新生物技术有限公司。兔抗人HIF-1α多克隆抗体为浓缩剂，购自武汉博士德生物工程有限公司；试验时稀释浓度为1∶50。
1.3 方法
所有标本均由10%甲醛固定、石蜡包埋，连续3 μm切片，采用免疫组织化学ElivisionTM二步法非生物素检测系统，已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照，DAB显色。实验操作严格按照说明书进行。
1.4 结果判断
HIF-1α的蛋白阳性信号主要表达在腺上皮细胞胞质内，显微镜下可见呈棕黄色颗粒。VEGF蛋白阳性主要表达在内膜细胞胞质内和血管内皮细胞胞质内。HIF-1α和VEGF蛋白表达的判定均参照Birner等[4]半定量测定的方法，据高倍镜下综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行判定。着色弱但明显强于阴性对照者为1分，染色清晰者为2分，染色强者为3分；阳性细胞占总细胞数的判定：10%～50%为2分，51%～80%为3分，>80%为4分。以上两项评分相加，阳性细胞<10%为(-)，3分为弱阳性(+)，4～5分为阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)。
1.5 统计学方法
应用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用精确概率法以及χ2检验，等级资料采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HIF-1α的表达
HIF-1α蛋白在子宫内膜异位症异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的阳性表达率分别为80.00%(24/30)、53.33%(16/30)、0(0/30)，差异有统计学意义(χ2=40.320，P<0.01)。在异位内膜中的表达高于在位内膜(χ2=4.8，P<0.05)；在异位和在位内膜中的表达高于正常子宫内膜(χ2=21.818，P<0.01)。异位和在位内膜以及正常子宫内膜中增生期和分泌期的表达差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。
表1 HIF-1α的表达(n)
2.2 VEGF的表达
VEGF蛋白在子宫内膜异位症异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的阳性表达率分别为83.33%(25/30)、60.00%(18/30)、6.67%(2/30)，差异有统计学意义(χ2=37.067，P<0.01)。在异位内膜中的表达高于在位内膜(χ2=4.022，P<0.05)；在异位和在位内膜中的表达高于正常子宫内膜(χ2=19.100，P<0.01)。异位和在位内膜以及正常子宫内膜中增生期和分泌期的表达差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。 (戴星 周静 胡鸣 孙玉芳)