染色体FISH检测技术在早孕期自然流产诊断中的临床意义(2)
1.2主要仪器与试剂
Olympus荧光显微镜，ThermoBrite自动杂交仪，恒温水浴箱，电子分析天平，烤片机，水平离心机；13/21、16/22及18/X/Y探针试剂盒均购于北京金菩嘉医疗科技有限公司。
1.3方法
1.3.1取材 选取在手术室无菌操作清宫手术下取出或自行排出的流产组织标本约10 g，放入已装有20 ml生理盐水的离心管中及时送检。
1.3.2 FISH操作 ①把流产胚胎组织倒入直径10 cm的培养皿里，用生理盐水冲洗两遍，用眼科剪剪下绒毛，将之尽量剪碎后转移到15 ml尖底离心管中。②加入经37℃预热的0.075 mol/L KCl 6 ml使劲吹打，置于37℃恒温水浴箱低渗30 min(中间吹打两次)。③加固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)2 ml，轻柔吹打混匀，37℃预固定10 min。④离心去上清，加固定液6 ml再次轻柔吹打混匀，离心弃上清液；再重复固定离心弃上清，然后制备细胞悬液，滴片。⑤75℃烤片30 min后进行FISH实验。⑥杂交后经56℃ 2×SSC洗涤5 min→0.1%NP40洗涤5 min。⑦取出玻片晾干 ......
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Olympus荧光显微镜，ThermoBrite自动杂交仪，恒温水浴箱，电子分析天平，烤片机，水平离心机；13/21、16/22及18/X/Y探针试剂盒均购于北京金菩嘉医疗科技有限公司。
1.3方法
1.3.1取材 选取在手术室无菌操作清宫手术下取出或自行排出的流产组织标本约10 g，放入已装有20 ml生理盐水的离心管中及时送检。
1.3.2 FISH操作 ①把流产胚胎组织倒入直径10 cm的培养皿里，用生理盐水冲洗两遍，用眼科剪剪下绒毛，将之尽量剪碎后转移到15 ml尖底离心管中。②加入经37℃预热的0.075 mol/L KCl 6 ml使劲吹打，置于37℃恒温水浴箱低渗30 min(中间吹打两次)。③加固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)2 ml，轻柔吹打混匀，37℃预固定10 min。④离心去上清，加固定液6 ml再次轻柔吹打混匀，离心弃上清液；再重复固定离心弃上清，然后制备细胞悬液，滴片。⑤75℃烤片30 min后进行FISH实验。⑥杂交后经56℃ 2×SSC洗涤5 min→0.1%NP40洗涤5 min。⑦取出玻片晾干 ......
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