稳表达人HSP72的人脐带间充质干细胞株的构建(1)

http://www.100md.com 2016年9月15日 《中国当代医药》2016年第26期

     [摘要]目的 构建含人HSP72的慢病毒，筛选获得稳定表达HSP72的hUC-MSC细胞系。方法 采用PCR方法从MGC fully sequenced human HSPAIA cDNA中调取HSP72基因的完整序列，利用双酶切及体外重组的方法获得pLV-HSP72-EGFP(2A)质粒，经PCR、测序方式鉴定成功后，对病毒进行包装。用病毒感染hUC-MSC，并用Puro进行抗性筛选可稳定表达HSP72的hUC-MSC细胞系。结果 构建的pLV-HSP72-EGFP(2A)测序结果与GenBank收录序列一致，包装得到pLV-HSP72-EGFP(2A)病毒，筛选获得稳定表达HSP72的hUC-MSC细胞系，ELISA方法检测显示获得的细胞株可过表达HSP72。结论 构建了获得稳定表达HSP72的hUC-MSC细胞系。

    [关键词]HSP72；人脐带间充质干细胞；慢病毒载体；转染

    [中图分类号] R329.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2016)09(b)-0004-05

    [Abstract]Objective To construct Lenti-viral Vector carrying human HSP72 gene ......