稳定表达HBx和MicroRNA—21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究(1)
[摘要]目的 研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法 采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6)，以质粒PcDNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板，PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体pEGFP-Nl進行双酶切，线性化得到重组质粒命名为pEGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a，并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞，作为pEGFP-HBx组；用脂质体法将质粒转染质粒载体pEGFP-Nl，作为pEGFP-NI质粒组。最后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养，培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 pEGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28% ......
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