人RAG2基因5′近端染色质结构定量差异分析及可接近区域转录调控机制研究(3)
1.7 qRT-PCR检测mRNA表达
RNAiso Plus(TaKaRa)纯化的总RNA，采用OrimeScript RT reagent kit(TaKaRa)反转录cDNA。qRT-PCR测定mRNA表达时，用SYBR Premix Ex TaqⅡ(TaKaRa)。以人Acin为管家基因，各样品检测数据进行3～6次重复试验，通过2-ΔΔCT方法计算目的mRNA的相对表达量。
1.8 统计学处理
采用SPSS 16.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1人RAG表达时，RAG2基因5′上游近端区域的染色质在T与B细胞中处于不同的开放状态
染色质特异性开放往往与顺式转录调控元件的存在相关[11，14]。将RAG+、RAG-淋巴细胞以及非淋巴细胞的RAG2 5′上游区域的DHS进行比较分析，结果如图1和图2A所示，在RAG+T细胞中，RAG2 TSS/-140 bp区域对DNase Ⅰ高度敏感(敏感性>90%)，-257 bp区域降至40%～60%，-337/-456 bp区域进一步下降至10%～20% ......
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RNAiso Plus(TaKaRa)纯化的总RNA，采用OrimeScript RT reagent kit(TaKaRa)反转录cDNA。qRT-PCR测定mRNA表达时，用SYBR Premix Ex TaqⅡ(TaKaRa)。以人Acin为管家基因，各样品检测数据进行3～6次重复试验，通过2-ΔΔCT方法计算目的mRNA的相对表达量。
1.8 统计学处理
采用SPSS 16.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1人RAG表达时，RAG2基因5′上游近端区域的染色质在T与B细胞中处于不同的开放状态
染色质特异性开放往往与顺式转录调控元件的存在相关[11，14]。将RAG+、RAG-淋巴细胞以及非淋巴细胞的RAG2 5′上游区域的DHS进行比较分析，结果如图1和图2A所示，在RAG+T细胞中，RAG2 TSS/-140 bp区域对DNase Ⅰ高度敏感(敏感性>90%)，-257 bp区域降至40%～60%，-337/-456 bp区域进一步下降至10%～20% ......
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