骨髓基质细胞自体移植兔坐骨神经的研究(2)

http://www.100md.com 2017年1月25日 《中国当代医药》2017年第3期

     1.4.2兔坐骨神经损伤模型的制作 兔称重从耳缘静脉注入10%水合氯醛致麻醉后，于双侧髋部消毒，置于无菌台并铺手术单。行髋关节后入路，依次切开皮肤、皮下、浅深筋膜，仔细止血，弯钳钝性分离臀大肌，显露坐骨神经分叉处。在分叉上方切开神经外膜，切除约8 mm长神经。用微量注射器吸取神经干细胞并注入神经缺损区内，缝合神经外膜及肌膜以加强对移植干细胞的包裹力。对照侧注射DMEM培养液。移植侧及对照侧随机选择，最后用明胶海绵包裹，在皮肤外标记实验组移植侧。将兔放入清洁笼具，预防感染，观察生命体征。

    1.4.3免疫组化染色 取细胞移植手术成功后1、2、4、8、16周的实验新西兰兔各2只，采用1%戊巴比妥钠以100 mg/kg注射入腹腔后麻醉。消毒后打开胸腔，暴露心脏，导管插入左心室，生理盐水快速冲洗，将4%多聚甲醛由插管处(pH7.4)灌注500 ml固定，由原切口切开皮肤皮下并暴露、剥离含移植干细胞段的坐骨神经。

    将剥离的兔坐骨神经依次移入10%～30%蔗糖(0.1 mol/L PB配制)溶液梯度浸泡，标本下沉后进行冰冻切片，片厚12 μm，贴于载玻片上 ......