Smad7 mRNA和NF—κBp65 mRNA及其蛋白在肝癌患者中的表达(2)
1.2方法
鼠单抗NF-κBp65购自美国Santa Crus公司，鼠单抗Smad7、Smad7 mRNA和NF-κBp65 mRNA原位杂交检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。应用免疫組化S-P法，实验步骤按说明书进行，DAB显色5 min。阳性对照由试剂公司提供，阴性对照由PBS缓冲液代替一抗作参照。原位杂交方法：石蜡切片常规脱水、浸蜡、包埋。氨丙基三乙氧基硅烷处理玻片，脱蜡至水，暴露核酸片段，后固定，预杂交，杂交(过夜)，洗涤，封闭，滴加生物素化鼠抗地高辛等，EAC显色后依次进行常规步骤，最后封片[4]。
1.3结果判定标准
采用双盲法对两种染色结果进行观察[5]，每张切片随机选择5个高倍视野(×400)，随机选取200个实质细胞，计算阳性细胞占比，最后计分：≤25%记1分，>25%～75%记2分，>75%记3分。将染色强度分为3级：阴性着色1分，弱着色2分，棕黄色3分；采用半定量积分法，根据两者的乘积判断结果，≥3分为阳性 ......
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鼠单抗NF-κBp65购自美国Santa Crus公司，鼠单抗Smad7、Smad7 mRNA和NF-κBp65 mRNA原位杂交检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。应用免疫組化S-P法，实验步骤按说明书进行，DAB显色5 min。阳性对照由试剂公司提供，阴性对照由PBS缓冲液代替一抗作参照。原位杂交方法：石蜡切片常规脱水、浸蜡、包埋。氨丙基三乙氧基硅烷处理玻片，脱蜡至水，暴露核酸片段，后固定，预杂交，杂交(过夜)，洗涤，封闭，滴加生物素化鼠抗地高辛等，EAC显色后依次进行常规步骤，最后封片[4]。
1.3结果判定标准
采用双盲法对两种染色结果进行观察[5]，每张切片随机选择5个高倍视野(×400)，随机选取200个实质细胞，计算阳性细胞占比，最后计分：≤25%记1分，>25%～75%记2分，>75%记3分。将染色强度分为3级：阴性着色1分，弱着色2分，棕黄色3分；采用半定量积分法，根据两者的乘积判断结果，≥3分为阳性 ......
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