鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因分析及同源性研究(2)
1.2方法
1.2.1菌株鉴定及药敏试验 所有分离菌株的培养鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》[4]进行，采用梅里埃VITEK-2 Compact全自动微生物分析仪对所有收集的菌株进行种属鉴定。采用K-B纸片扩散法测定菌株对常用18种抗菌药物的敏感性。药敏试验结果判定标准按照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Lab？鄄oratory Standards Institute，CLSI)2010的标准判定[5]。
1.2.2 OXA酶基因检测PCR扩增 此过程由厦门安普利生物技术公司协作完成。①样本的处理：挑取平板上的单菌落，加入25 μl的TE缓冲液水溶解，振荡均匀后加入25 μl的标本处理液混匀，100℃加热10 min，13 000 r/min离心10 min，取上清备用；②50 μl的扩增体系如下：上游引物0.2 μl，下游引物0.2 μl，dNTPS 0.6 μl，Taq酶0.5 μl，模板DNA 2 μl，DNA通用液46.5 μl；③PCR扩增过程：95℃预变性2 min；95℃变性20 s ......
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1.2.1菌株鉴定及药敏试验 所有分离菌株的培养鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》[4]进行，采用梅里埃VITEK-2 Compact全自动微生物分析仪对所有收集的菌株进行种属鉴定。采用K-B纸片扩散法测定菌株对常用18种抗菌药物的敏感性。药敏试验结果判定标准按照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Lab？鄄oratory Standards Institute，CLSI)2010的标准判定[5]。
1.2.2 OXA酶基因检测PCR扩增 此过程由厦门安普利生物技术公司协作完成。①样本的处理：挑取平板上的单菌落，加入25 μl的TE缓冲液水溶解，振荡均匀后加入25 μl的标本处理液混匀，100℃加热10 min，13 000 r/min离心10 min，取上清备用；②50 μl的扩增体系如下：上游引物0.2 μl，下游引物0.2 μl，dNTPS 0.6 μl，Taq酶0.5 μl，模板DNA 2 μl，DNA通用液46.5 μl；③PCR扩增过程：95℃预变性2 min；95℃变性20 s ......
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