赤道几内亚比奥科岛恶性疟原虫MSP—1和MSP—2基因多态性研究(2)
1.2 疟原虫的鉴别和虫密度计算
采用WHO推荐的白细胞疟原虫计数法，在油镜下对吉姆沙染色后血涂片进行镜检。按照本实验室以往建立定量PCR及熔解曲线的方法进行虫种鉴定[9]，同时以四种疟原虫(间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、恶性疟原虫)的质粒为参照物。
1.3基因组DNA(gDNA)的提取
寄生虫的gDNA由利用Chelex-100提取方法[9]。用打孔器取直径5 mm干血斑，置于1.5 ml离心管，先加入l ml的无菌水浸泡2 h，然后16 000 r/min，离心5 min，弃上清；再加160 μl的5% 的Chelex-100混悬液，56℃加热2 h，95℃变性8 min，振荡30 s，16 000 r/min，离心5 min，吸取上清，-20℃保存备用。
1.4 PfMSP-1和PfMSP-2基因的分型
按照PlasmoDB(http：//plasmodb.org)，基因ID为PF3D7_0930300 and PF3D7_0206800的PfMSP-1和PfMSP-2序列合成各自的巢式PCR引物(表1)[10] ......
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采用WHO推荐的白细胞疟原虫计数法，在油镜下对吉姆沙染色后血涂片进行镜检。按照本实验室以往建立定量PCR及熔解曲线的方法进行虫种鉴定[9]，同时以四种疟原虫(间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、恶性疟原虫)的质粒为参照物。
1.3基因组DNA(gDNA)的提取
寄生虫的gDNA由利用Chelex-100提取方法[9]。用打孔器取直径5 mm干血斑，置于1.5 ml离心管，先加入l ml的无菌水浸泡2 h，然后16 000 r/min，离心5 min，弃上清；再加160 μl的5% 的Chelex-100混悬液，56℃加热2 h，95℃变性8 min，振荡30 s，16 000 r/min，离心5 min，吸取上清，-20℃保存备用。
1.4 PfMSP-1和PfMSP-2基因的分型
按照PlasmoDB(http：//plasmodb.org)，基因ID为PF3D7_0930300 and PF3D7_0206800的PfMSP-1和PfMSP-2序列合成各自的巢式PCR引物(表1)[10] ......
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