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编号:13266631
蛋白激酶C活化对兔视网膜色素上皮细胞抗氧化能力的影响及机制研究(1)
http://www.100md.com 2018年11月25日 《中国当代医药》 2018年第33期
蛋白激酶C活化对兔视网膜色素上皮细胞抗氧化能力的影响及机制研究,核因子E2相关因子2,谷胱甘肽
     [摘要]目的 通過激活兔视网膜色素上皮细胞(RPE)内蛋白激酶C(PKC),观察RPE细胞核内转录因子E2相关因子2(Nrf2)的表达情况以及细胞内谷胱甘肽(GSH)的表达水平。方法 应用免疫荧光染色鉴定原代培养兔视网膜色素上皮细胞(RPE),将第3代RPE细胞分为空白对照组(15%胎牛血清的DMEM培养液,n=8)、PMA组(15%胎牛血清的DMEM培养液+4 μl 100 nmol/L PKC特异激活剂佛波酯溶液,n=8)和PMA+BST组(用4 μl 10 μmol/L Nrf2抑制剂鸦胆苦醇溶液预处理RPE细胞1 h后,吸出并加入含PMA 4 μl 100 nmol/L的15%胎牛血清的DMEM培养液,n=8),培养24 h后,采用Western-blot方法检测Nrf2蛋白在胞质和胞核内的表达,采用GSH试剂盒检测各组RPE细胞内GSH的表达,对细胞核内Nrf2及细胞内GSH表达进行相关性分析,采用免疫荧光染色检测Nrf2蛋白在细胞内转位情况。结果 RPE细胞胞质内可见黑色素颗粒,呈长梭形,鼠抗人角蛋白(AE1/AE3)免疫荧光染色鉴定呈强阳性;Western blot检测结果显示 ......
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