1.2实验方法

    所有实验组和对照组病例手术切除病灶立即放入4%组织固定液(Solarbio Technology Co.，Ltd，批号P1110)中浸泡，常温下放置24 h，流水冲洗，石蜡包埋收集标本。实验时每个标本用切片机连续切片3～4张，切片厚度5 μm表在载玻片上;行苏木精-伊红(HE;Solarbio Technology Co.，Ltd，批号G1120)染色及GAD65/67免疫组化染色，免疫组化实验步骤如下：二甲苯浸泡切片5 min 3次，梯度酒精水化，pH值为6.0的柠檬酸煮沸15 min修复抗原，室温冷却;用SP试剂盒(福州迈新公司，批号KIT-9720)进行免疫染色，0.3%过氧化氢封闭血清抗原，4℃孵化过夜，切片再用兔anti-GAD65/67孵化(ThermoFisher，规格1∶100;编号PA1-84572)室温30 min，磷酸盐缓冲液(PBS，武汉Boster公司，编号Boster AR0030)冲洗，最后用二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(福州迈新公司、编号DAB0031)免疫组化显色2 min，复染用mayer氏液(Solarbio Technology Co.，Ltd，编号G1080)染色5 min，流水冲洗固蓝，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。每张免疫组化玻片在电子显微镜(日本，Nikon ......